探討合併 simvastatin 和troglitazone 對人類多形性神經膠質母細胞瘤細胞之凋亡與遷移的作用

多形性神經膠質母細胞瘤 (Glioblastoma multiforme, GBM)是最具侵略性人類腦癌，由於手術和放射治療的進展以及傳統常規藥物療法，皆無法讓病人的預後得到改善，因此新的治療方式是必須進一步的探究。Simvastatin (S)是一種HMG-CoA (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A)還原酶抑製劑，troglitazone (T)是一種PPAR-γ (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)抑製劑藥物，這兩種藥物化合物都屬於小分子藥物，被認為能夠通過血腦屏障 (Blood-Brain Barrier)，而先前的研究已經證明兩種藥物都具有抗癌作用，且當它們分別與不同的化學物質共同作用時，皆會更增強抗癌效果。由於這兩種藥物合併用於治療腦癌的研究較少且未有更詳盡的探討，本研究將進一步探討合併給予S和T在血漿中可達到的濃度對GBM8401細胞死亡和遷移的影響以及其基本機制。在MTT assay細胞存活數量的結果，我們分別給予GBM8401細胞vehicle (對照)或S (2.5 μM)或T (5 μM)或S (2.5 μM)加T (5 μM)處理72小時；S降低30%而T沒有顯著差異；S+T降低50%的細胞存活數量；於神經膠質母細胞瘤細胞株U87也觀察到有類似的結果。流式細胞儀分析指出， S+T增加了在sub-G1期的細胞凋亡且顯著降低在S期的細胞族群比例。免疫墨點法分析結果顯示，S+T會導致細胞凋亡酵素PARP和caspase 3之裂解；促進細胞週期G1/S phase進行之調控相關的主要蛋白ppRb、E2F-1、pCDK2、cyclin E、cyclin D1及細胞增殖蛋白PCNA的表現量有明顯下降。於影響細胞遷移作用的部分，Culture-insert實驗結果顯示S (1 μM)或T (2.5 μM)皆沒有顯著差異而S+T則會造成約50%的抑制效果；transwell assay結果顯示S (1 μM)+T (2.5 μM)有明顯的抑制細胞爬行作用；而在相同的時間點測試之MTT結果皆僅有略微的抑制細胞存活之作用。此外， S+T可能會透過降低GBM8401細胞去黏附的能力來降低細胞遷移/轉移的能力。由於Cyr61蛋白質的表現會隨著腦瘤之惡性程度而隨之大量增高，在本論文實驗中也針對Cyr61蛋白進行相關探討；實驗結果建議S+T能抑制GBM8401細胞之內源性特異表現量之Cyr 61蛋白。綜合以上所有實驗結果，兩個藥物的合併可能會藉由誘導GBM8401細胞凋亡、降低促進細胞週期G1/S phase進行之調控相關主要蛋白及抑制de novo DNA產生來達到抑制細胞存活的作用；透過降低GBM8401細胞去黏附的能力來減緩細胞遷移的能力；透過抑制過度Cyr 61蛋白的表現來達到加強抑制癌細胞生長之作用。