製備及分析可辨認卵巢癌相關抗原的單鏈變異片段抗體

　卵巢癌是女性十大癌症之ㄧ，目前臨床大都以「CA-125」作為卵巢癌表現的腫瘤標記，但是靈敏度並不令人滿意。根據先前的研究利用卵巢癌病人血清中的抗體從peptide library進行篩選顯示OVTA-1可能是卵巢癌的腫瘤相關蛋白基因。本篇研究目的希望藉由噬菌體展現技術（phage display technique）製作並篩選出具有OVTA-1特異性結合反應的多株抗體與單株抗體。根據Gene Bank所公布OVTA-1的基因序列全長為3792 base pairs (bps)，可轉譯出1264個胺基酸。本實驗重組其中長度為1002bp片段DNA，選殖入pET-21a質體，再利用大腸桿菌表現出與His融合的OVTA-1蛋白。西方墨點法實驗結果顯示抗His的抗體可辨識到His-OVTA-1融合蛋白。純化後的His-OVTA-1融合蛋白，以皮下注射方式注射來亨雞大腿部位，由雞蛋中純化出免疫球蛋白(IgY)，再利用酵素連結免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)以及西方墨點法證實免疫過後雞隻所誘發出來的抗體可辨認His-OVTA-1片段蛋白。為了建構出可與His-OVTA-1蛋白結合的scFv噬菌體基因庫，首先自雞脾臟中萃取出total RNA反轉錄成cDNA後利用聚合酶鏈鎖反應(PCR)，做出雞隻抗體的重鏈和輕鏈變異區基因片段，最後將這些基因片段連結後接入pComb3x載體中。未來希望能利用此基因庫作為OVTA-1研究和檢驗治療用之抗體來源，並探討其應用於預防及治療之潛力。