PART 1：Antrodia Camphorate純化物抑制人類直腸腫瘤細胞(COLO 205) 生長及細胞週期G0/G1調控 PART 2：探討LOX(Lysyl Oxidase)在乳癌細胞中所扮演之角色

PART 1：本篇論文研究來自三種不同牛樟芝(Antrodia camphorate；AC) 的子實體中之純化物4,7- Dimethoxy-5- methyl-l,3- benzodioxole (稱做SY-1)。AC是一種藥用傘菌，主要生長在牛樟樹樹幹腐朽之心材內壁，或枯死倒伏之牛樟樹木材潮濕表面，而且可以利用於中藥上，具有抗腫瘤和免疫調節作用。我們證實SY-1能有效抑制人類直腸腫瘤細胞(COLO 205)的生長，濃度在75-225μM 的SY-1的濃度劑量會使癌細胞之細胞週期停留在G0/G1期，而在SY-1 濃度大於 225μM時，則會誘導細胞產生細胞凋亡(apoptosis)。SY-1調控之COLO 205細胞週期停留在G0/G1期時，p53 、 p21/Cip1及p27/Kip1蛋白的表現會增加，而cyclin D1 、cyclin D3及 cyclin A表現量則減少。相較之下，我們使用人類正常結腸黏膜細胞(FHC)，給予SY-1後，並沒有引起顯著的影響細胞週期G0/G1期調控蛋白的表現量改變。將COLO 205細胞培養於軟性瓊膠(soft agar)上，給予SY-1之後觀察群落之生成與型態，發現細胞群落聚集的現象有明顯降低的趨勢。根據以上結果證實，我們首先證實SY-1可以抑制COLO 205細胞的增殖，主要是經由抑制細胞生長和群落的聚集。
PART 2：Lysyl oxidase是一種需銅的氨基氧化酶，位於細胞外基質，會與膠原蛋白和彈力蛋白相互作用。最近研究發現，lysyl oixdase會去氧化細胞外基質內的蛋白，lysyl oixdase對組織生長、細胞增生、細胞內訊息傳遞及細胞轉移是扮演重要的角色。由Real time PCR定量mRNA的表現量，發現lysyl oixdase在乳癌腫瘤病人組織表現量比正常組織較多，大約占62%。更進一步利用雷射顯微擷取Laser Capture Microdissection (LCM)和IHC的方法，確認其再現性及表現分布。另一方面，利用實驗室現有乳癌及正常細胞株中lysyl oixdase的表現，發現在MDA-MB-231細胞株中lysyl oixdase被大量表現。在過去研究發現，lysyl oixdase會與鄰近的lysine結合分泌出過氧化氫，會使FAK/Src pathway被活化，進而使癌細胞移動能力增加。因此使用lysyl oixdase抑制劑(β-aminopropionitrile；βAPN)，抑制其活性，發現過氧化氫分泌減少和下游FAK/Src pathway磷酸化也降低。接著利用wound healing assay觀察MDA-MB-231細胞移動能力，由結果得知加入lysyl oixdase抑制劑能有效抑制MDA-MB-231細胞移動能力。因此，我們發現lysyl oixdase在乳癌細胞中大量表現，主要功能是促進細胞移動能力。