探討ENO1之表達和腫瘤細胞轉移蛋白表現的關係

已有文獻指出α-Enolase (ENO1)在某些人類癌症病患之腫瘤中其表達量之高低和腫瘤轉移及病患之存活有密切關係，例如：Lung cancer、Hepatocellular carcinoma (HCC)，在老鼠之黑色素細胞腫瘤(melanoma cell line)也觀察到類似結果。ENO1的overexpression可能藉由許多機轉，造成腫瘤細胞的侵犯和轉移。
本論文之研究目的分兩部份：第一部份，將以黑色素腫瘤細胞株分析ENO1表現與腫瘤細胞migration能力之關聯性、並調控ENO1表現以了解是否相對影響腫瘤細胞migration相關蛋白或其基因的表現。第二部份，將分析肝癌病人在藥物治療後不同時期體內對ENO1免疫反應之變化。
材料和方法：以高轉移之老鼠黑色素腫瘤細胞B16F1L5為材料，以short hairpin RNA(shRNA)方式建立ENO1 knockdown之細胞株，及一株ENO1 knockdown之對照細胞株(B16F1L5 pSM2 vector control)，進行下列實驗：(一)以in vitro slide wound-healing assay，探討降低ENO1表達是否影響腫瘤細胞之migration。(二)以RT-PCR分析調降ENO1是否影響migration 相關基因(uPA、uPAR、MMP-2、MMP-9、cdc42、RhoC) mRNA的表現。(三)收集腫瘤細胞蛋白，以western blotting analysis分析ENO1 expression和migration相關基因(MMP-2、MMP-9、c-Met、FAK、FAK(pY397)、FAK(Tyr407)、cdc42、RhoC)蛋白表現量關聯性。(四)收集21位肝癌病患在Thalidomide不同治療時期的血清檢體與50位健康人血清檢體，以偵測病患和健康人表達ENO1抗體之程度，其中21位病患加測AFP作為腫瘤變化之指標，以了解anti-ENO1 Ab變化與腫瘤變化二者關聯性。
實驗結果：(一) ENO1 knockdown之B16F1L5 shENO1 2E11 migration程度明顯比對照細胞株B16F1L5 pSM2 vector control低，顯示knockdown ENO1表達會顯著影響腫瘤細胞migration程度。(二)低轉移B16F1細胞株經老鼠體內篩選成高轉移之B16F1L5細胞株後，增加了ENO1 expression；而shRNA knockdown ENO1 expression，致B16F1L5 shENO1 2E11較對照細胞株B16F1L5 pSM2 vector control減少ENO1 expression。ENO1 knockdown之B16F1L5 shENO1 2E11相較於對照細胞株B16F1L5 pSM2 vector control，cdc42、RhoC mRNA的表現因knockdown ENO1 expression而減少。(三) ENO1 knockdown之 B16F1L5 shENO1 2E11相較於對照細胞株B16F1L5 pSM2 vector control，c-Met、FAK、FAK(pY397)、FAK(Tyr407)、cdc42、RhoC蛋白表現量皆因knockdown ENO1 expression而減少。(四) anti-ENO1 Ab變化：健康人主要分布在1:100000以下，病患主要分布在1:150000～1:250000間，顯示病患有顯著anti-ENO1，其中僅8位病患有明顯AFP值、ENO1抗體關聯性，其餘病患未有明確關聯性。
結論：knockdown ENO1的基因表現，明顯降低migration程度，影響細胞遷移。ENO1 expression可能藉由調控相關訊息而調控腫瘤細胞之migration。依AFP與anti-ENO1之結果未有明確關聯性，可能是檢體數量不夠以致沒有很明顯的趨勢指標。