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口服投予聚乙二醇微脂體包覆特定啟動子之質體DNA於腦和脊髓之基因傳遞
Other Title
Oral Specific Promoter Plasmids DNA Delivery by PEGylated Liposomes in Brain and Spinal Cord
Type
thesis
Date Issued
2013-07-11
Author(s)
伍函辰
Advisor
廖嘉鴻
Subjects
系所名稱：藥學院生技製藥產業碩士專班
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：廖嘉鴻
共同指導教授：
口試委員：林嬪嬪;張淑芬
中文關鍵字：基因傳遞;微脂體;口服
語文別：中文
指導教授：廖嘉鴻
共同指導教授：
口試委員：林嬪嬪;張淑芬
中文關鍵字：基因傳遞;微脂體;口服
Abstract
本實驗利用pMBP-bcl xL-hRluc之質體DNA，同時帶有抗細胞凋亡之功能性蛋白的基因Bcl-xL及產生水母冷光酵素Luciferase的基因，並由髓鞘基質蛋白基因(Myelin basic protein; MBP)之啟動子做調控，再與聚乙二醇微脂體(PEGylated liposomes, PLs)進行口服投予，評估基因傳遞。
利用動態光散色儀及Zeta電位評估質體DNA/PLs複合物，再以原子力顯微鏡及穿透式電子顯微鏡觀測粒子表面及形狀，發現在DNase環境下，複合物可以延緩質體DNA至70分鐘左右才被降解，進行溶血性試驗時，發現到質體DNA/PLs較無毒性;也以裸鼠十二指腸於Franz diffusion cell評估劑型之穿透性。
於裸鼠實驗中，在48小時內口服投予質體DNA/PLs複合物六個劑量後，以Coelenterazine受質定量Luciferase酵素活性，結果發現，在有PLs之劑形中均有顯著性提升，同時在Luciferase mRNA及bcl-xL mRNA絕對及相對定量，發現於腦或脊髓有上升4~5倍。在Rhodamine標定質體DNA並複合PLs後，口服投予至裸鼠體內，發現在腦及脊髓中可以觀測到Rhodamine存在，並利用腦及脊髓進行免疫染色，也可以發現Luciferase及Bcl-xL表現。
利用動態光散色儀及Zeta電位評估質體DNA/PLs複合物，再以原子力顯微鏡及穿透式電子顯微鏡觀測粒子表面及形狀，發現在DNase環境下，複合物可以延緩質體DNA至70分鐘左右才被降解，進行溶血性試驗時，發現到質體DNA/PLs較無毒性;也以裸鼠十二指腸於Franz diffusion cell評估劑型之穿透性。
於裸鼠實驗中，在48小時內口服投予質體DNA/PLs複合物六個劑量後，以Coelenterazine受質定量Luciferase酵素活性，結果發現，在有PLs之劑形中均有顯著性提升，同時在Luciferase mRNA及bcl-xL mRNA絕對及相對定量，發現於腦或脊髓有上升4~5倍。在Rhodamine標定質體DNA並複合PLs後，口服投予至裸鼠體內，發現在腦及脊髓中可以觀測到Rhodamine存在，並利用腦及脊髓進行免疫染色，也可以發現Luciferase及Bcl-xL表現。