Bradykinin 刺激人類纖維母細胞結締組織生長因子表現的訊息傳遞探討

Bradykinin (BK) 為kinin類的成員，是一種具有免疫活性的胜?式A為九個胺基酸所組成。 BK屬於自泌素(autacoid)的一種，在體內會誘導許多發炎的反應。結締組織生長因子(CTGF)是一種與發炎反應纖維化過程有關的蛋白。本論文所要探討的是在人類肺臟纖維母細胞中，BK誘發的CTGF蛋白表現的訊息傳導路徑。結果顯示BK隨著劑量和時間相關反應增加CTGF蛋白的表現。BK也可以依劑量增加而誘導CTGF-promoter-luciferase活性增加，且BK誘導CTGF蛋白表現可以被actinomycin D (轉錄抑制劑) 和 cycloheximide (轉譯抑制劑) 所抑制，表示BK誘導CTGF蛋白的表現是經由合成新蛋白而來。且給予B2受體拮抗劑 (HOE140) 也可以抑制BK誘導的CTGF蛋白表現；相反地，B1受體拮抗劑 (lys-(leu8)des-Arg9- bradykinin) 則不會抑制BK的反應。在人類肺纖維母細胞中，BK會使ERK、p38 MAPK和JNK三者的磷酸化。進一步給予ERK抑制劑 (PD98059)、p38 MAPK抑制劑(SB203580)和JNK抑制劑(SP600125)，發現只有給予SP600125 (JNK的抑制劑) 會抑制BK誘導CTGF蛋白的表現。另外我們也使用dominant negative的JNK1及JNK2 ( JNK1 DN及JNK2 DN ) 做轉染實驗，發現JNK 1 DN 和JNK 2 DN 二者皆可抑制bradykinin誘導的CTGF蛋白的表現。此外，BK也會使c-Jun磷酸化和增加CTGF-promoter-luciferase的活性。另外使用AP-1抑制劑 (curcumin)可抑制BK誘導CTGF蛋白的表現。在Chromatin immunocipitation (ChIP) 實驗結果得知，在人類肺纖維母細胞中BK可以增加AP-1 DNA序列與蛋白的鍵結，也發現在CTGF啟動子中-747至-184的區段可增加CTGF-promoter-luciferase的活性。綜合以上的實驗結果得知，在人類肺纖維母細胞中BK經由B2受體，使JNK和c-Jun磷酸化，之後使c-Jun和c-fos與CTGF啟動子AP-1的 DNA序列結合，最終導致CTGF蛋白表現。