利用小鼠模式探討Mcl-1與Tom70間交互作用在生理上的重要性

Mcl-1是一個半衰期很短的Bcl-2家族蛋白成員，在抗細胞凋亡中扮演上游重要的角色。在先前實驗中發現Mcl-1會與Tom70交互作用，且幫助Mcl-1定位於粒線體。在這篇論文中我們要利用小鼠模式研究Mcl-1與Tom70間的交互作用在生理上的重要性。我們建立一個會表現但不會與Tom70交互作用的突變hMcl-1(DM mutant)，接著產生Wt與DM hMcl-1基因轉殖小鼠去rescue mcl-1基因剔除小鼠。我們的數據指出hMcl-1蛋白質的表現量對小鼠胚胎的發育十分的重要，只有表現量最高的line (Wt hMcl-1 Tg#30) 可以得到出生後的rescued小鼠。而中等表現相當量的兩個line (Wt hMcl-1 Tg#20與DM hMcl-1 Tg#27)卻無法得到出生之後的rescued小鼠，而有趣的是DM hMcl-1(Tg#27)與Wt hMcl-l(Tg#20)相比，可以rescue Mcl-1基因剃除小鼠胚胎至更進階的程度。我們也利用rescued小鼠纖維母細胞(MEF)作為研究模式，觀察到DM hMcl-1在DNA damage傷害下與Wt hMcl-1相比具有更好的抗細胞凋亡能力，在ER stress下兩者就沒有明顯的差異。免疫螢光染色分析中我們無法分辨Wt與DM hMcl-1定位至粒腺體能力的差異。然而在cytochrome C釋出分析中，DM hMcl-1保護cytochrome C由粒線體釋放的能力是比Wt hMcl-1差的。此外由共同免疫沉澱實驗中發現DM hMcl-1與Puma 和Noxa間的親和力是比Wt hMcl-1好的。結合所有實驗指出，在胚胎發育時期，Mcl-1與Tom70間的交互作用扮演著很複雜的角色，而此交互作用生理上的意義需要更深入的研究才可得知。