Okadaic acid誘發大鼠脂肪細胞脂肪分解時細胞內perilipin與beta-actin的含量變化

中文摘要 (Abstract in Chinese) 已有研究證實okadaic acid處理脂肪細胞，可以誘發hormone-sensitive lipase (HSL)的分佈位置改變，由平滑內質網轉移至脂肪滴表面，進而促進脂質分解。但是其對於其他重要的脂肪滴表面蛋白質(如perilipins與beta-actin)的影響卻尚未有研究報告。所以本實驗擬探討在okadaic acid處理脂肪分解反應發生時，分析perilipins及beta-actin這兩種重要的脂肪滴表面蛋白質的含量變化，並探討可能的作用機轉。本實驗取材自大白鼠的脂肪組織，分離出脂肪細胞，加入藥物isoproterenol以及okadaic acid處理，並以測量甘油的釋放量作為評估脂質分解的效果。結果顯示isoproterenol的正反應對照組以及okadaic acid的實驗組，隨著藥物處理的時間逐漸增加，甘油的釋放量都逐漸上升。兩種藥物同時處理時，甘油的釋放量則有顯著的加成作用，顯示兩種藥物可能經由不同訊息傳遞途徑引發脂質分解。藥物處理後分離出脂肪細胞內的脂肪滴，並且利用電泳(SDS-PAGE)與免疫轉漬方法分析脂肪滴表面蛋白質中的perilipins以及beta-actin的含量，結果發現以isoproterenol或是okadaic acid處理皆會導致脂肪滴表面的perilipins含量下降；但是脂肪滴表面的beta-actin含量卻無明顯改變。此外，利用PKA的抑制劑(KT 5720), PKC的抑制劑(calphostin C)與PKG的抑制劑(KT 5823)，皆無法有效抑制okadaic acid所引發的脂解作用；然而以vanadate (protein phosphotyrosine phosphatase的抑制劑)處理卻可以有效地抑制okadaic acid誘發的脂解反應。推測okadaic acid可能不是經由已知的PKA, PKC, PKG等途徑，而是經由抑制protein phosphatase type 1 (PP1)與type 2A (PP2A)的途徑，分別活化perilipins與HSL，進而誘發perilipins脫離脂肪滴表面，同時促進HSL轉移至脂肪滴表面加速脂質分解。然而vanadate抑制okadaic acid誘發脂質分解的機轉仍待研究深入探討。 關鍵字：脂肪細胞, beta-actin, 脂肪分解, okadaic acid, perilipin