黑殭菌素B(Destruxin B)對大腸癌細胞HT-29之抑制效果及機制

黑殭菌素(Destruxin)是由昆蟲寄生性真菌(entomogenous fungi)之一 (Matarhizium anisopliae)所分泌出的毒素，在已分離出的三十餘種中，本研究中採用的是由此一菌種分泌的二次代謝物Destruxin B(DB)作為抗腫瘤製劑。DB對昆蟲具有毒性且運用在生物農藥已有數年之久。在之前的研究中發現到在體外試驗或是活體試驗DB對於DBA/2老鼠L5178Y淋巴癌細胞有抑制的效果。
本論文將探討由黑殭菌素B (Destruxin B)對人類大腸癌細胞株HT-29細胞造成生長抑制或毒殺作用。由初期的實驗結果得知HT-29在高於1.29uM DB作用下可以有效的抑制癌細胞生長。再利用DNA片段及Annexin V染色的方式更進一步地證實出Destruxin B會引起HT-29細胞死亡是經由細胞凋亡而來，而非壞死。再以西方點墨法的結果證實procaspase 3和PARP蛋白降解有增加的情形，更能證實細胞是由於凋亡而死。HT-29在給於DB 48小時之後，可以由西方點墨的結果得知較上游的caspase 9表現進而使得cytochrome c表現上升;Bcl-2的表現減少，Bax和AIF的增加更可以確定出HT-29經由DB作用後，會經由粒線體的內在路徑而走向細胞凋亡。此外，經由DB刺激下，可誘使p53的表現進而抑制cyclin D1與CDK4的表現而使得細胞週期停滯在G0/G1期。此結果也與流式細胞儀的結果相吻合。CDK2、cdc2和cyclin B些微的減少也導致細胞週期停滯在S和G2/M期。也由螢光顯微鏡的結果顯示出DB會使得HT-29產生一些凋亡核質(apoptotic nuclei)也部份印證出由西方點墨法的結果。
綜合以上結果得知，DB可以抑制人類大腸癌細胞株HT-29的生長是透過內在的細胞死亡路徑及影響細胞週期的G0/G1 期和部份的S和G2/M期所致。