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探討新穎四環衍生物TC-N2 對乳癌細胞之影響
Other Title
TC-N2: a novel tetracyclic derivative induced cell cycle
arrest in breast cancer cell
arrest in breast cancer cell
Type
thesis
Date Issued
2016-07-13
Author(s)
温欣憲
Advisor
何元順
黃旭山
Subjects
系所名稱：醫學科學研究所
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：何元順
共同指導教授：黃旭山
口試委員：吳志雄;王應然;潘敏雄
中文關鍵字：四環衍生物；乳癌；雌激素受體；細胞週期停止
英文關鍵字：tetracyclic derivative (TC-N2);breast cancer;estrogen receptor
語文別：中文
指導教授：何元順
共同指導教授：黃旭山
口試委員：吳志雄;王應然;潘敏雄
中文關鍵字：四環衍生物；乳癌；雌激素受體；細胞週期停止
英文關鍵字：tetracyclic derivative (TC-N2);breast cancer;estrogen receptor
Abstract
四環也稱做苯並?m啶、氮雜萘，是一個雜環芳香性有機化合物．
四環是一個具有強烈臭味的無色吸濕性液體，基本分子式是C9H7N，
四環是冶金、染料、聚合物以及農用化學品工業的重要催化劑，它也
可以用作消毒劑、防腐劑以及溶劑，而在過去研究中已經有證實許多
種的四環衍生物對不同的癌細胞具有毒殺並誘導癌細胞自噬作用或
抑制生長，如：6-cinnamamido-quinoline-4-carboxamide，藉由損害血
癌細胞溶酶體的功能以及抑制MEK/ERK 的signaling pathway 使血癌細胞cell proliferation 的能力下降，並且活化caspase-9 跟PARP 的裂
解促使血癌細胞發生細胞自噬的現象，而在本研究中我們利用新穎的
四環衍生物TC-N2 (10-Chloro-6-ethylamino-12H-thiochromeno[2,3-
c]quinolin-12-one )觀察對乳癌細胞的影響，初步我們利用MTT assay觀察到TC-N2 會對ER+ (estrogen receptor positive)的MCF-7 乳癌細胞具有抑制其細胞生長的能力，而對三陰性乳癌細胞MDA-MB-231 以及正常乳腺細胞MCF-10A 並不具有明顯的抑制生長的效果，在進一步的利用流式細胞儀(Flow cytometry)分析發現在加入TC-N2 的組別中我們發現MCF-7 細胞的生長都停滯於G0/G1 的細胞週期，然而其明確機制仍屬未知，因此接著我們利用西方墨點法(western blotting)觀察加入TC-N2 後的MCF-7 細胞的蛋白質表現差異，其中我們發現調控細胞週期的蛋白CDK2、CDK4 的表現隨著TC-N2 濃度的增加而減少，而P53 蛋白則有上升的趨勢，然而這無法解釋TC-N2 僅對RE+的細胞有效果，因此也觀察了MCF-7 細胞ER (estrogen receptor)表現情況，我們發現在加入TC-N2 後MCF-7 細胞的ER (estrogen receptor)幾乎消失，而其下游所調控細胞生長的訊息傳遞路徑也受到抑制如：PI3K/AKT、MERK/ERK、P38 MAPK 等路徑的訊息傳遞都受到影響，因此本研究初步結果是首先證明新穎的四環衍生物TC-N2 能夠抑制ER+ (estrogen receptor)的MCF-7 乳癌細胞生長藉由分解ER 的表現並使下游的訊息傳遞停止，以及細胞週期調控蛋白CDK2、CDK4 的表現。
四環是一個具有強烈臭味的無色吸濕性液體，基本分子式是C9H7N，
四環是冶金、染料、聚合物以及農用化學品工業的重要催化劑，它也
可以用作消毒劑、防腐劑以及溶劑，而在過去研究中已經有證實許多
種的四環衍生物對不同的癌細胞具有毒殺並誘導癌細胞自噬作用或
抑制生長，如：6-cinnamamido-quinoline-4-carboxamide，藉由損害血
癌細胞溶酶體的功能以及抑制MEK/ERK 的signaling pathway 使血癌細胞cell proliferation 的能力下降，並且活化caspase-9 跟PARP 的裂
解促使血癌細胞發生細胞自噬的現象，而在本研究中我們利用新穎的
四環衍生物TC-N2 (10-Chloro-6-ethylamino-12H-thiochromeno[2,3-
c]quinolin-12-one )觀察對乳癌細胞的影響，初步我們利用MTT assay觀察到TC-N2 會對ER+ (estrogen receptor positive)的MCF-7 乳癌細胞具有抑制其細胞生長的能力，而對三陰性乳癌細胞MDA-MB-231 以及正常乳腺細胞MCF-10A 並不具有明顯的抑制生長的效果，在進一步的利用流式細胞儀(Flow cytometry)分析發現在加入TC-N2 的組別中我們發現MCF-7 細胞的生長都停滯於G0/G1 的細胞週期，然而其明確機制仍屬未知，因此接著我們利用西方墨點法(western blotting)觀察加入TC-N2 後的MCF-7 細胞的蛋白質表現差異，其中我們發現調控細胞週期的蛋白CDK2、CDK4 的表現隨著TC-N2 濃度的增加而減少，而P53 蛋白則有上升的趨勢，然而這無法解釋TC-N2 僅對RE+的細胞有效果，因此也觀察了MCF-7 細胞ER (estrogen receptor)表現情況，我們發現在加入TC-N2 後MCF-7 細胞的ER (estrogen receptor)幾乎消失，而其下游所調控細胞生長的訊息傳遞路徑也受到抑制如：PI3K/AKT、MERK/ERK、P38 MAPK 等路徑的訊息傳遞都受到影響，因此本研究初步結果是首先證明新穎的四環衍生物TC-N2 能夠抑制ER+ (estrogen receptor)的MCF-7 乳癌細胞生長藉由分解ER 的表現並使下游的訊息傳遞停止，以及細胞週期調控蛋白CDK2、CDK4 的表現。