碳酸酐酶IX抗體之製備及研究

碳酸酐酶IX (carbonic anhydrase IX, CAIX)是一種跨膜蛋白，在正常組織中表現量低，但在腫瘤細胞中會過度表達，而CAIX表現主要是由於缺氧環境而被誘導。臨床研究顯示，缺氧環境會促使腫瘤更加惡化甚至有癌細胞增殖及轉移的現象發生，因此，想要研發製備針對CAIX治療的抗體。在本篇論文當中，我們將CAIX基因選殖到蛋白表現載體pET-21a(+)以及pET-32a(+)中，並表現純化出與his-tag融合的CAIX重組蛋白，再將其重組蛋白用來免疫雞隻以產生特異性多株抗體。將經過免疫之雞蛋中純化取得IgY抗體，以西方墨點法(Western blot)及酵素免疫分析法(ELISA)測試，結果顯示IgY抗體與重組CAIX融合蛋白具有結合能力，且在西方墨點法結果中辨認不到陰性對照組的融合蛋白，證實IgY對CAIX融合蛋白具特異性辨認能力。我們成功建構了short linker與long linker的anti-CAIX抗體基因庫，且分別的大小為5x106與6x106，經過bio-panning的過程，總共篩選出了五株序列不同anti-CAIX scFv，並且可以辨認到不同片段的CAIX重組蛋白，且可以分為兩種辨認的位置，分別為anti-CAIX S2、S3、L6、L10結合於353-413和L5結合於154-413個胺基酸之間。此外五株單株抗體都能夠利用大腸桿菌表現系統進行純化，在未來完成anti-CAIX 單株抗體對於CAIX+癌細胞株結合能力測試，可應用於治療與辨識CAIX+癌細胞。