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A1-抗胰凝乳蛋白酵素在胃癌和大腸直腸癌血漿中轉譯後修飾的表現
Other Title
The expression of post-translational modification of Alpha-1-antichymotrypsin in the plasma of gastric cancer and colorectal cancer
Type
thesis
Date Issued
2014-06-20
Author(s)
林宏澤
Advisor
林景堉
Subjects
系所名稱：醫學檢驗暨生物技術學系所
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：林景堉
共同指導教授：
口試委員：廖辰中;林榮俊
中文關鍵字：A1-抗胰凝乳蛋白酵素;轉譯後修飾
語文別：中文
指導教授：林景堉
共同指導教授：
口試委員：廖辰中;林榮俊
中文關鍵字：A1-抗胰凝乳蛋白酵素;轉譯後修飾
Abstract
世界衛生組織2012 年統計資料中，全球大腸直腸癌發生率排名第三位，而
胃癌發生率排名第六位。目前大腸直腸癌的血液腫瘤標記常見的是CEA，胃癌
常用的血液腫瘤標記為CEA、CA 19-9 和CA 72-4，但這些生物標記的靈敏度和
特異性並不是很好。有文獻探討Alpha-1- antichymotrypsin (ACT) 在胃癌和大腸
直腸癌血漿中蛋白質濃度來當作診斷工具，但比較少的研究探討轉譯後修飾。
本實驗主要探討ACT 在這兩癌症血漿中轉譯後修飾的表現，希望找到有意義的
轉譯後修飾可以開發為胃癌和大腸直腸癌之免疫檢測或質譜檢測平台的生物標
記。本實驗材料是收集正常人和癌症的血漿檢體，先進行一維凝膠電泳
(SDS-PAGE)和西方墨點法(Western blot)，觀察ACT 在血漿中的蛋白質表現量。
接著進行免疫沈澱法，經由SDS-PAGE 確認抗體抓到A1-抗胰凝乳蛋白酵素的
位置，之後將ACT band 切下來利用膠體內水解(In-Gel digestion)將要測定的蛋白
質分離出來，再用奈米級液相層析串連質譜儀(nano-LC/MS/MS)分析並尋找可能
發生的修飾然後鑑定出轉譯後修飾的位置，並加以量化比較。實驗結果發現ACT
的蛋白質表現量在胃癌早期與正常人相比沒有明顯的差異，但在胃癌晚期與正
常人相比有明顯差異，然而ACT 在大腸直腸癌早期有明顯差異。接著觀察ACT
的轉譯後修飾表現，ACT在胃癌血漿中有三個修飾分別是Trimethylation (Asp-194)、n-Octanoate (Thr-269)和Palmitoylation (Lys-177)，其中Trimethylation 修飾的差異有三倍多。而在大腸直腸癌血漿中有三個修飾分別是Hydroxylation (Asn-323)、Methylation-2 (Glu-334)和4-Hydroxy-2-nonenal (Arg-298)，其中Hydroxylation 修飾的差異有兩倍多。本實驗結論是利用串聯質譜鑑定出這些轉譯後修飾的位置並且量化比較，可當作胃癌和大腸直腸癌的生物標記。
胃癌發生率排名第六位。目前大腸直腸癌的血液腫瘤標記常見的是CEA，胃癌
常用的血液腫瘤標記為CEA、CA 19-9 和CA 72-4，但這些生物標記的靈敏度和
特異性並不是很好。有文獻探討Alpha-1- antichymotrypsin (ACT) 在胃癌和大腸
直腸癌血漿中蛋白質濃度來當作診斷工具，但比較少的研究探討轉譯後修飾。
本實驗主要探討ACT 在這兩癌症血漿中轉譯後修飾的表現，希望找到有意義的
轉譯後修飾可以開發為胃癌和大腸直腸癌之免疫檢測或質譜檢測平台的生物標
記。本實驗材料是收集正常人和癌症的血漿檢體，先進行一維凝膠電泳
(SDS-PAGE)和西方墨點法(Western blot)，觀察ACT 在血漿中的蛋白質表現量。
接著進行免疫沈澱法，經由SDS-PAGE 確認抗體抓到A1-抗胰凝乳蛋白酵素的
位置，之後將ACT band 切下來利用膠體內水解(In-Gel digestion)將要測定的蛋白
質分離出來，再用奈米級液相層析串連質譜儀(nano-LC/MS/MS)分析並尋找可能
發生的修飾然後鑑定出轉譯後修飾的位置，並加以量化比較。實驗結果發現ACT
的蛋白質表現量在胃癌早期與正常人相比沒有明顯的差異，但在胃癌晚期與正
常人相比有明顯差異，然而ACT 在大腸直腸癌早期有明顯差異。接著觀察ACT
的轉譯後修飾表現，ACT在胃癌血漿中有三個修飾分別是Trimethylation (Asp-194)、n-Octanoate (Thr-269)和Palmitoylation (Lys-177)，其中Trimethylation 修飾的差異有三倍多。而在大腸直腸癌血漿中有三個修飾分別是Hydroxylation (Asn-323)、Methylation-2 (Glu-334)和4-Hydroxy-2-nonenal (Arg-298)，其中Hydroxylation 修飾的差異有兩倍多。本實驗結論是利用串聯質譜鑑定出這些轉譯後修飾的位置並且量化比較，可當作胃癌和大腸直腸癌的生物標記。