白色念珠菌在Fluconazole和Terbinafine的壓力下所造成遺傳改變之探討

白色念珠菌(Candida albicans )是絕對二倍體（obligate diploid）的酵母菌， 在2004年，白色念珠菌mating type locus被發現與麵包酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有相似的性別基因，以二倍體與二倍體交配的方式，產生了擬有性世代，但其有性世代（a/α）仍然不明。本實驗室在2007年，發現在給與Fluconazole的含有phloxine B 的PDA培養基中C. albicans會有高頻率的W/O表現型轉換。而本研究是為了更進一步了解C. albicans遺傳學變化以及發生的減數分裂的可能性，調查此遺傳的變化是否與抗藥性的機制有關，並且利用分子試驗的方式去進行佐證。初步工作先驗證在不同種之Candida在Fluconazole壓力下，是也有相同的轉換，而結果僅有C. tropicalis產生類似現象。而後在四個C. albicans菌株當中(ATCC 14053, BCRC 20512, SJ2S08 and ATCC 22816) 隨機分離出Opaque菌落（即培養基中的粉紅色菌落）。這些個別的粉紅色菌落經過第二次的培養分別經過Fluconazole 1、2、3、4週處理，利用聚合酶鏈鎖反應分析以及流式細胞儀分析。於聚合酶鏈鎖反應分析中發現31.25%的菌株至少有一個MTL基因沒有被放大出來。然而這些MTL基因有缺乏的菌落經過1至7周培養，於流式細胞儀分析發現，在培養前期菌株DNA處於單倍體有較高的趨勢，但培養後期菌株DNA則趨向二倍體。另外，在Fluconazole 至少2週處理下，我們發現高頻率的類似擔子細胞菌落群，利用顯微操作器將四個子細胞以及母細胞分離。聚合酶鏈鎖反應分析，第一次檢測發現四個子細胞菌落群有一些同型合子（homozygotes）存在，第二次進行檢測則發現所有的四個子細胞菌落群都是異型合子( heterozygotes )。這樣的結果顯示C. albicans的減數分裂不是經由類似擔孢子這樣的結構亦或是C. albicans可能是一個雌雄同株的酵母菌。