以親水性作用層析結合質譜同步定量5-甲基四氫葉酸與甲基供給體

單碳代謝 (one-carbon metabolism, OCM)在體內維持許多生理反應，是一基本的代謝循環路徑。在高半胱胺酸 (homocysteine, Hcys)進行甲基轉移作用形成甲硫胺酸 (methionine)時，需要5-甲基四氫葉酸 (5-methyltetrahydrofolate, 5-MTHF)或甜菜鹼 (betaine)甲基供給體 (Methyl donor)參與反應。先前研究顯示體內高半胱胺酸濃度過高與思覺失調症疾病嚴重度呈正相關。補充5-甲基四氫葉酸及甜菜鹼皆能降低血中高半胱胺酸濃度，然而，影響高半胱胺酸形成甲硫胺酸的四項供給體血中濃度的關係待釐清，因此須要建立檢測方法學。由於過去研究多以正相層析方式檢測betaine、choline及DMG，而此類分析管柱難以滯留極性較低之化合物 (如5-MTHF)，因此，本研究旨在以親水性作用層析 (Hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)結合質譜同步定量5-甲基四氫葉酸等甲基供給體，提供一新分析方法同時檢測其血中濃度。研究方法：建立以親水性作用層析結合串聯式質譜儀分析系統，利用標準品 (5-MTHF, betaine, choline及DMG) 及個別內部標準品，來進行確效試驗。研究結果：本研究之方法學中5-MTHF、betaine、choline及DMG (12~96 nM, 12~96 μM, 0.3~45 μM及0.4~10 μM) 之血漿外加標準品檢量線具有良好線性關係 (r2> 0.99)。以透析後血漿外加標準品，並以甲醇:乙腈 (2: 1)作為萃取溶劑，並且萃取後樣品以甲醇:乙腈 (25: 75, 含1g/L ascorbic acid)作為回溶溶劑，其同日間精密度變異係數均小於10%。結論：本研究建立以親水性分析管柱結合質譜方法分析人體血漿樣品，以甲醇:乙腈 (2: 1)作為萃取溶劑配製步驟簡易、能在單次檢測流程中同步定量內生性甲基供給體 (5-MTHF、betaine、choline及DMG)；但仍需進行異日間確效、基質效應及安定性試驗，以確認應用於分析人體此四種甲基供給體濃度之可行性。