以高效能液相層析法應用於質體 DNA與聚合微膠混合體的測定

先前本實驗室曾使用此三嵌段共聚合物當作質體 DNA的載體，證實可以增加轉殖基因的表現量，然而實際質體 DNA的包覆率 (encapsulation efficiency) 仍不清楚，因此本實驗目的為探討在使用微膠體當作載體包覆質體 DNA 後的包覆率。首先利用Zeta potential、 pH與膠體電泳分析對質體 DNA、聚合微膠體溶液、質體 DNA與聚合微膠混合體溶液三者的物理特性做探討，質體 DNA為對 pH 敏感的物質，而聚合微膠體溶液則相當穩定不會隨著 pH值改變，質體 DNA與聚合微膠混合體溶液則有兩種 Zeta 電位的分布；另外在膠體電泳分析實驗中，在應用聚合微膠體包覆質體 DNA後，有不同凝集 (aggregation) 現象出現。利用 HPLC 配合在 UV 260 nm偵測下，質體 DNA溶液在第9.3分有單一 peak形成，而在質體 DNA與聚合微膠混合體溶液，則在第6.3 分鐘中另一新形成之 peak，同時分別收集質體 DNA和質體 DNA與聚合微膠混合體在 HPLC分析下所形成 peak範圍，之後利用加入螢光染劑 Picogreen®、膠體電泳分析和即時定量聚合酶鏈鎖反應等方法對其定性及定量，做再次確認評估。
在利用 HPLC分析之圖譜計算包覆率後，經0.3%聚合微膠體包覆1.5、4.5、9 ng/μl質體 DNA後，其包覆量分別為1303.9 ± 139.75 ng、2541.7 ± 621.22 ng、2639.4 ± 555.08 ng，包覆率則各為37.76 ± 3.90%、23.96 ± 6.00%、13.62 ± 2.83%，與利用即時定量聚合酶鏈鎖反應所得包覆率各為30.97 ± 8.02、22.31 ± 8.97、13.77± 1.68 %，兩者結果類似；而經3%聚合微膠體包覆1.5、4.5、9 ng/μl質體 DNA後，其包覆量分別為1558.8 ± 86.75 ng、3561.2 ± 247.32 ng、4215.2 ± 356.67 ng，包覆率則各為44.84 ± 2.10%、33.71 ± 2.50%、22.09 ± 1.82%。而在藥物釋放過程中，質體 DNA與聚合微膠混合體 (10 ng/μl plasmid DNA/0.3%、3% polymeric micelles)的釋放速率為7.39、8.19 ng/min。