抗CEBPD蛋白雞源抗體之製備及定性

CCAAT/增強子結合蛋白δ (CEBPD)為C/EBP家族的一員。先前研究發現，CEBPD在白介素6或脂多醣的刺激下，表現量會相較於正常生理狀態下高。此外，人類CEBPD已被證實可調控參發炎基因的表現，且與阿茲海默症及類風濕性關節炎有所相關。然而，目前市面上並無高特異性辨認CEBPD之抗體可用於治療或檢測CEBPD相關之疾病。有鑑於此，本次研究目的在於製備高特異性辨認CEBPD之抗體，並測試其和CEBPD之結合能力。我們首先利用大腸桿菌系統大量表現與純化CEBPD全長重組蛋白，並以CEBPD全長蛋白作為抗原免疫雞隻。我們也利用基因轉殖技術將CEBPD的四個片段基因接到pET-21a(+)載體上。免疫後我們從雞蛋中純化出IgY多株抗體，利用西方墨點法和酵素免疫分析法證實IgY和CEBPD-FL重組蛋白有特異性的結合能力。接著我們犧牲雞隻取其脾臟利用噬菌體展示技術建構出大小分別為5.8 × 106短鏈和1.1 × 107長鏈的單鏈抗體基因庫。經過篩選後，噬菌體篩選酵素免疫分析法顯示出有特異性的抗體被放大出來。從定序分析我們共獲得五株不同的抗CEBPD 單鏈抗體，包含有S1、S4、L4、2L3和2L4。這五株單鏈抗體經表現及純化後，在西方墨點法和酵素免疫吸附法證實能辨認CEBPD全長重組蛋白。並在競爭型酵素免疫分析法推測出這五株單鏈抗體的解離常數約為10-6~10-7 M。這五株單鏈抗體對CEBPD片段蛋白結合力並不理想，只有全長有反應，且在西方墨點法在目前的測試中無法辨識細胞裂解液裡的CEBPD蛋白。由上述結果得知，篩選出之能辨認CEBPD重組蛋白的單鏈抗體，雖然須進一步測試與細胞內生性CEBPD蛋白之結合能力，但我們相信這些抗體在未來是有潛力被應用於檢測CEBPD相關之疾病。