Options
利用鐵螯合劑提高運鐵蛋白受體標靶的反譯寡核苷酸的傳遞
Other Title
Using Desferoxamine to Enhance Transferrin Receptor-Targeted Antisense Oligonucleotides Delivery
Type
thesis
Date Issued
2010-06-24
Author(s)
何俊蒼
Advisor
邱士娟
Subjects
系所名稱：藥學研究所
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：邱士娟
共同指導教授：
口試委員：廖嘉鴻;胡德民
中文關鍵字：反譯寡核苷酸;微脂粒;鐵螯合物;運鐵蛋白;標靶運輸
語文別：中文
指導教授：邱士娟
共同指導教授：
口試委員：廖嘉鴻;胡德民
中文關鍵字：反譯寡核苷酸;微脂粒;鐵螯合物;運鐵蛋白;標靶運輸
Abstract
癌症是目前人類的十大死因之一，人類為了治療癌症做了許多嚐試。其中，反譯寡核苷酸( Oligonucleotides , ODN )在癌症治療方面是令人感興趣的。反譯寡核苷酸是一種antisense藥物 ，可借由阻斷某些基因表現的轉錄或轉譯來達到抑制蛋白質合成，進而達到治療的目的。
但是這些antisense藥物，包含反譯寡核苷酸，在體內中容易被核酸酶所破壞。也因為其表面帶有負電性，使得被攝入細胞膜內有些困難。所以選定合適的載體是antisense藥物的首要目標。為了增加細胞膜的穿透率及對特定細胞的標靶性，本研究針對微脂粒此種劑型以及其修飾方式進行更進一步探討。
本實驗中所使用的微脂粒由DC-Chol/egg-PC/PEG-DSPE 以22.5:76:1.5 mol%組成，其粒徑大小平均為201.5±15.97 nm，其包覆ODN 的能力約為75.5%，表面電荷為16±3.5mV，粒子之膠體安定性可達8週。為了使其具有標靶特性，在微脂粒表面利用運鐵蛋白當作配位體 ( ligand ) 經後嵌入法修飾。
另一方面，本實驗利用鐵螯合物(desferoxamine, DFO)使細胞的鐵缺乏，進而增加細胞表面運鐵蛋白(transferrin)受體的表現。在實驗中，我們利用給予細胞0, 5, 10 µg/ml的DFO來比較在第5, 8, 11, 14天的細胞表面運鐵蛋白受體的表現。接著投予Free ODN,G3139 ( 1µM,3µM ) 的G3139微脂粒以及經過運鐵蛋白修飾後的G3139微脂粒( 1µM,3µM )，並比較以上不同給藥方式對BCL-2表現造成的影響。
但是這些antisense藥物，包含反譯寡核苷酸，在體內中容易被核酸酶所破壞。也因為其表面帶有負電性，使得被攝入細胞膜內有些困難。所以選定合適的載體是antisense藥物的首要目標。為了增加細胞膜的穿透率及對特定細胞的標靶性，本研究針對微脂粒此種劑型以及其修飾方式進行更進一步探討。
本實驗中所使用的微脂粒由DC-Chol/egg-PC/PEG-DSPE 以22.5:76:1.5 mol%組成，其粒徑大小平均為201.5±15.97 nm，其包覆ODN 的能力約為75.5%，表面電荷為16±3.5mV，粒子之膠體安定性可達8週。為了使其具有標靶特性，在微脂粒表面利用運鐵蛋白當作配位體 ( ligand ) 經後嵌入法修飾。
另一方面，本實驗利用鐵螯合物(desferoxamine, DFO)使細胞的鐵缺乏，進而增加細胞表面運鐵蛋白(transferrin)受體的表現。在實驗中，我們利用給予細胞0, 5, 10 µg/ml的DFO來比較在第5, 8, 11, 14天的細胞表面運鐵蛋白受體的表現。接著投予Free ODN,G3139 ( 1µM,3µM ) 的G3139微脂粒以及經過運鐵蛋白修飾後的G3139微脂粒( 1µM,3µM )，並比較以上不同給藥方式對BCL-2表現造成的影響。