利用噬菌體展示法篩選出對srr-1 蛋白具高度特異性結合能力的單鏈變異片段抗體

B型鏈球菌是一種常見的致病菌，常引發新生兒腦膜炎，造成新生兒的死亡，B型鏈球菌可以穿過血腦屏障造成腦膜炎，而B型鏈球菌的srr-1蛋白在此機制扮演一個重要的角色，因此針對srr-1發展一個快速的檢驗方法是必需的。
在本實驗我們針對B型鏈球菌的膜蛋白srr-1利用基因重組的方法表現不同長度的片段。將蛋白大量的表現之後再純化，其中核苷酸序列961-1929(srr-1 N2N3)的片段是其中表現量最多的片段，利用高純度的N2N3蛋白打入萊亨雞的皮下，使其產生免疫反應產生抗srr-1的IgY，從蛋黃的部份將抗srr-1 IgY純化出來，收集4 次免疫反應的IgY，利用西方墨點法及ELISA測定IgY的效價。
將免疫雞隻的脾臟取出，抽取mRNA建立抗體重鏈及輕鏈的基因庫，將建立的基因庫送入噬菌體內，在噬菌體表面抗體蛋白經過4次panning篩選及富化對srr-1蛋白具高度特異性的scFv。從第四次panning所長的菌落中隨機挑選15個菌落以電泳分析phagemid DNA，從中挑選有接入scFv基因的phagemid送入TOP 10 F表現scFv抗體片段並以其分子量及anti-chicken light chain 抗體來作確認，利用ELISA和西方墨點法分析scFv抗體片段對N2N3蛋白的特異性結合能力。在之後的實驗這些重組srr-1蛋白、多株抗體IgY和單株抗體scFv會被測試抑制B型鏈球菌感染或生長的效果，以這些結果為基礎將能夠幫助我們發展快速的檢驗試劑或治療被B型鏈球菌感染的新生兒。