利用血小板運載抗癌藥物進行體外試驗

背景：
血小板（PLT）在止血中發揮重要的生理功能。它們也可以在腫瘤微環境中靶向和與癌細胞緊密相互作用。活化的PLT釋放促進腫瘤生長的生長因子，保護腫瘤細胞免受免疫識別，並有利於轉移，而腫瘤細胞有助於PLTs的活化。由於PLTs - 腫瘤細胞交叉，PLT可以成為抗癌藥物的高效藥物遞送系統。多柔比星（Doxorubicin，DOX）是一種有效的抗腫瘤藥物，通過配製聚乙二醇不會完全消除副作用。因此，使用PLT作為DOX的新型藥物遞送系統值得評估。
目的：
通過研究DOX的捕獲和釋放能力以及PLT-DOX在體外對A549肺癌和HCT-116結腸癌細胞活力的影響進行癌症治療，評估PLTs作為靶向藥物載體的用途。
材料與方法：
將治療級血小板濃縮物（PC）離心以造粒PLT。將沉澱物重新懸浮在pH 7.4的血小板添加劑溶液（PAS）中的100μMDOX中，並將混合物在37℃下孵育1小時以包封DOX（PLT-DOX），通過離心除去上清液。在一些實驗中，將PLT-DOX沉澱物懸浮於6％DMSO中並在-80℃冷凍（FPLT-DOX）。通過熒光檢測（激發：470nm;發射：585nm）的高效液相色譜（HPLC）測定DOX捕獲效率（％EE）。通過HPLC檢測DOX從PAS（pH 7.4;對照組），PBS（pH 7.4,6.5,5.5），血漿和癌細胞環境中的PLT-DOX和FPLT-DOX的體外釋放。 PLT-DOX和FPLT-DOX通過5％SDS溶解後，在585nm的分光光度法測定了PLT和FPLT中DOX的包封能力和穩定性。用各種濃度的PLT-DOX，FPLT-DOX，游離DOX和PLT或FPLT（對照）處理A549人肺癌細胞和HCT116人結腸癌細胞48小時，然後通過CCK-8測定法進行分析以確定活力。
結果：
DOX在PLT-DOX中的封裝效率約為50±2.2％。每個新鮮PLT包埋的DOX的平均含量為15-40萬分子，相當於100-nm-脂質體中的15-30萬分子的DOX。 PLTs在pH 7.4的儲存PAS容量顯示出在血小板保質期期間捕獲DOX的良好能力。 DOX在pH5.5的PBS中比在pH6.5或pH7.4下更有效地釋放，並且顯示出類似於存儲在PBS，PAS中和在pH 7.4顯然在等離子體中的PLT-DOX。模擬腫瘤環境的條件增強了DOX釋放。 A549和HCT-116細胞的生存能力受到PLT-DOX和FPLT-DOX的影響，與游離DOX一樣有效，而且比通過PLT和FPLT有效釋放脂質體DOX更多。
結論：
PLTs在封裝功能性DOX分子方面顯得有效，並且可以提供有益的遞送系統，其提供生物相容性，無毒性，優異的控制釋放特性和延長的循環時間。 PLT-DOX在體外對肺癌和結腸直腸癌細胞株發揮有效的細胞毒性。