探討Notch訊息傳導路徑對於轉錄因子YY1的調控作用所扮演之角色

Notch訊息傳導路徑可調控許多的細胞活動﹐包括生長、分化、細胞週期、細胞凋亡…等。Notch為細胞膜上之受體蛋白﹐結構為異二聚物的型式﹐Notch受體蛋白與ligand結合後﹐會引發Notch訊息傳導路徑向下傳遞﹐Notch受體經酵素切割﹐而釋放出Notch受體的活化型式(NIC)。NIC由細胞質進入到細胞核中﹐藉由與轉錄因子CBF1結合﹐而結合於特定之DNA序列上﹐藉此調控基因的表現﹐此為CBF1-dependent的Notch訊息傳導路徑﹐但Notch訊息傳導路徑也可能經由CBF1 independent的路徑﹐但其詳細機制目前並不清楚。
之前的研究﹐已觀察到Notch1受體的活化型式(N1IC)﹐與轉錄因子YY1具有直接結合作用﹐且YY1會抑制藉由CBF1的Notch訊息傳導路徑。基於以上發現﹐YY1可調控Notch訊息傳導路徑﹐是否Notch訊息傳導路徑同樣可能會影響YY1之生物功能﹐故本論文擬探討N1IC對於YY1調控轉錄作用之過程中﹐是否具有調控的功能。
藉由報導基因分析結果發現﹐YY1抑制帶有野生株 YY1結合序列之報導基因的表現﹐此抑制現象會因為N1IC的表現而被逆轉﹐此結果顯示N1IC或許可對YY1下游基因有正向調控的作用。此外﹐藉由oligoprecipitation 及 Chromatin immunoprecipitation (ChIP) 實驗發現﹐N1IC藉由與YY1結合﹐而一起結合於YY1 結合序列上。此外在Notch訊息傳導路徑中﹐很重要的轉錄因子CBF1並沒有參與在此過程中﹐故N1IC對於YY1調控轉錄作用之調控﹐可能是經由CBF1-independent的型式。
本論文同時探討N1IC是否會影響YY1下游基因之表現﹐藉由西方墨點法﹐發現內生性之c-Myc蛋白表現﹐會因為N1IC的存在而增加﹐而c-Myc之表現已被報導受YY1所調控﹐藉由報導基因分析結果發現﹐N1IC可提升具有c-Myc啟動子序列的報導基因活性﹐同時藉由ChIP實驗﹐發現N1IC與c-Myc啟動子序列﹐在細胞內有直接的結合關係。綜合以上結果指出﹐Notch藉由與基因啟動子序列之交互作用﹐而影響YY1所調控之基因—cMyc的表現﹐且此作用可能藉由CBF1-independent的型式而達成。