Apoptosis signal regulated kinase 1 在 peptidoglycan 誘導 RAW 264.7巨噬細胞 cyclooxygenase-2表現的角色探討

我們之前的研究證實肽聚醣 (peptidoglycan, PGN) 刺激RAW 264.7 巨噬細胞環氧化酶-2 (cyclooxygenase-2, COX-2)表現是經由活化Ras/Raf-1/ERK 及 NF-B 的訊息傳遞路徑而來 (J. Biol. Chem., 279: 20889-20897, 2004)。在本篇論文中，我們進一步探討 apoptosis signal regulated kinase 1 (ASK1)、c-jun N-terminal kinase (JNK)、activator protein-1 (AP-1) 及 CCAAT/enhancer binding protein  (C/EBP) 在PGN 刺激 RAW 264.7 巨噬細胞COX-2 蛋白表現中所扮演的角色。PGN誘導 COX-2 的表現會被 ASK1 dominant negative mutant (ASK1DN)、JNK抑制劑 (SP600125)、JNK1 dominant negative mutant (JNK1DN)、JNK2DN 以及 AP-1 抑制劑 (curcumin) 所抑制。 PGN 會時間依賴性地誘導 TRAF6 及 ASK1 聚集至TLR2。RAW 264.7 巨噬細胞受到 PGN 刺激後會時間依賴性地誘導 14-3-3脫離ASK1使得ASK1去磷酸化而進一步導致ASK1的活化及其下游的JNK及 c-jun 的活化。而 PGN 所誘導 JNK 的活化則會被 ASK1DN 及SP600125 所抑制。另一方面，細胞在給予 PGN 刺激後也可見到 AP-1 會和特定的 DNA 序列結合，同時在報告基因 (reporter assay) 的實驗也可見到 AP-1轉錄活性增加。而 PGN 所誘導的 AP-1 報告基因活性的增加會被 SP600125及 curcumin 所抑制。C/EBP蛋白的表現在 PGN 刺激下也會時間依賴性的增加，同時伴隨著 C/EBP和特定的 DNA序列結合。而在報告基因實驗更發現PGN所誘導的 COX-2 報告基因活性的增加會因其基因序列上C/EBP 結合位置突變而被抑制。綜合以上實驗結果，我們發現在RAW264.7巨噬細胞中PGN會經由引發TLR2和TRAF6的結合，而導致TRAF6/ASK1/JNK/AP-1路徑的活化，使得 C/EBP表現增加並活化，最終誘導 COX-2 的表現。