製備及分析可辨認New Delhi metallo-beta-lactamase 1(NDM-1) 相關抗原的抗體及其應用

New Delhi metallo-beta-lactamase 1（NDM-1）是目前很重要的研究方向，主要是因為NDM-1會造成細菌有多重抗藥性，且多數藥物都無法有效控制他的活動力，目前對抗這種細菌幾乎無藥可用，因此對NDM-1的研究可以令我們更加了解此細菌的病理及生理，並藉由快速診斷試劑的研發供臨床確定更有效的治療策略。因此本篇研究中我們利用化學的方式合成全長的NDM-1基因，並針對此基因片段設計引子後經由聚合酶鏈鎖反應（Polymerase chain reaction, PCR）的方式大量增加全長810bp的NMD-1基因並且偵測此PCR方法的敏感性。同時間將此片段轉殖到大腸桿菌中表現重組的GST-NDM-1與His-NDM-1蛋白，經由SDS-PAGE確認NDM-1的分子量與純度後，再利用重組的GST-NDM-1蛋白來免疫雞隻與兔子，經過四次的追加注射後兩種動物的血清中都產生非常強的體液性多株IgY與IgG抗體反應。這兩種抗體都可以很清楚地辨識轉漬在Nitrocellulose membrane的GST-NDM-1蛋白，同時它們於酵素連結免疫吸附分析法( enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)的測試中也展現對GST-NDM-1蛋白相當好的特異性結合能力。
接著本次研究另外收集了幾株臨床上對所有的beta-lactam類抗生素包括penicillins、 cephalosporins、 monobactams 和 carbapenems都沒有效的抗藥性Klebsiella pneumoniae菌株並利用上述PCR、ELISA、Western blot等方法直接偵測臨床菌株，結果呈現陰性反應推測可能原因為這些抗藥菌株並未帶有NDM1基因。在接下來的研究中可以著重在臨床菌偵測的部分並且加強這些抗體的專一性例如製備單株抗體。本研究希望這抗體的發現可以應用在研發檢驗試劑上以對於臨床上快速篩檢NDM-1能有所幫助，並探討其日後可能的應用。