開發卵清蛋白類病毒樣PLGA奈米顆粒誘導小鼠體內免疫原性之研究

次單位疫苗的優點是因為它為非病毒基因體，不具傳染性且可簡單保存。當病毒樣顆粒疫苗利用抗原自體組裝後，可形成重複的抗原片段模仿病毒的外部結構，提高免疫原性，被抗原呈現細胞吞噬，並蓄積在淋巴結，活化免疫反應。但常見生產病毒樣顆粒的平台如細菌或酵母菌，其蛋白質轉譯後修飾與哺乳類動物會有所差異，進而影響蛋白質結構，使得此平台有所限制。本研究將開發，卵清蛋白類病毒樣聚乳酸甘醇酸奈米顆粒 (Ovalbumin virus like PLGA nanoparticles, OVA-VLPN) 的載體系統，病毒樣聚乳酸甘醇酸奈米顆粒開發為蛋白質次單位疫苗平台，以便接種宿主，可以產生更有效與特異性的中和抗體。相較於一般生產病毒樣顆粒的系統，沒有表達系統造成汙染的風險與高成本設備支出。本研究採用單乳相溶劑揮發法，利用卵清蛋白的硫醇基團與帶有馬來酰亞胺的DSPE-PEG2000-Maleimide經麥克爾加成反應 (Michael addition reaction) 反應後，製備成OVA-VLPN，其產率為37.76±0.7 %，粒徑為160.33±13.3 nm、PDI為0.164±0.04、ζ(mV)為-39.6±10.16。在 4°C 下，顆粒大小與均一性於28天內維持一定安定性，具有良好的安定性。於冷凍電子顯微鏡 (cryo-electron microscopy)下，觀察到完整球形結構與均一性的ovalbumin (OVA) 修飾於顆粒表面。在體外試驗中，OVA-VLPN能夠誘導CD80與CD86的活化，引起樹突細胞的成熟並且增強細胞吞噬能力。而在體內研究中，V25組別 (OVA-VLPN, 25 μg OVA and 5 μg Quil-A) 顯示出高度IgG與CD4+CD8+ T 細胞。具備抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)與記憶型T細胞的特性，在未來可用於治療癌症以及防止癌症復發的潛力。在心肌纖維、肝細胞、脾髓細胞、肺泡或腎小球上皮細胞中沒有發現明顯的發炎現象、腫脹區域以及細胞損傷，顯示OVA-VLPN在主要器官中表現出良好的生物相容性與安全性。本研究開發的OVA-VLPN具有效增強體液性免疫反應，誘導抗體生成以及具有高度安全性。具有極大潛力應用於廣泛適用的疫苗平台。