利用人類血清白蛋白奈米粒子作為反譯寡核苷酸之載體

以蛋白質為基質奈米粒子作為藥物載體在目前的研究中相當突出，主要是由於其良好生物安定性及低的毒性。在眾多血清白蛋白中人類血清白蛋白(HSA)由於其無毒性、生物可相容性、不具抗原性及生物可降解性，因此有相當的顯著性。而本次實驗主要是要探討以人類血清白蛋白奈米粒子(HSA nanoparticles)作為反譯寡聚核苷酸(antisense oligonucleotides，ODNs)的運輸載體。
　　本次實驗的HSA nanoparticles (HSA NPs)以退溶法的方式製備，所使用的退溶劑為酒精。在完成退溶反應後，以交聯劑戊二醛(glutaraldehyde)或加熱變性的方式使之安定。本次實驗中，改變許多變因，包括：酒精量的改變、交聯劑量的改變、加熱時間的改變、ODN加入量的改變。乘載ODN之HSA NPs(ODN loaded HSA NPs)以吸附法(adsorption)的方式將ODN吸附在HSA NPs上或以併入法(incorporation)的方式使ODN與HSA分子結合。製備完成的產物以二次水純化，粒子大小、粒子分散性及表面電位以Zetasizer 3000測得。以蛋白質定量的方式評估所形成的HSA NPs量，以TNBS試劑評估未發生交聯反應胺基酸基團量，以波長260 nm評估HSA NPs之ODN乘載量，利用螢光測定的方式測定HSA NPs之釋放趨勢，使用流式細胞儀及雷射共軛焦顯微鏡評估細胞攝入情形，並且以MTS assay評估HSA NPs的細胞毒性。
　　在本次實驗的結果顯示，以退溶法製備的E STIR OVERNIGHT；0.5G粒徑為128.5±3 nm。L-AD STIR OVERNIGHT；0.5G粒徑為174.2±8 nm，乘載能力為88.6±4%。L-IN STIR OVERNIGHT；0.5G粒徑為132.5±16 nm，乘載能力為73.2±6%。安定性於63天內都相當良好。K562細胞在有血清的環境相較於無血清的環境有較佳的攝入HSA NPs能力，在有血清環境下給予6.895 μM的L-AD STIR OVERNIGHT；0.5G 24 HR，能有87.67±6.4%的細胞攝入。給予K562細胞L-IN STIR 1 HR；HEAT 1 HR；0.5G 48 HR 其細胞存活率為74.71±2.8%。
　　整體而言，本次實驗所製成的HSA NPs有相當的安定性且有良好的乘載ODN能力，HSA NPs能順利地被K562細胞攝入。