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檢測大腸桿菌外膜蛋白A抗原決定位
Other Title
Antigenic Mapping on Outer Membrane Protein A of Escherichia coli
Type
thesis
Date Issued
2017-06-20
Author(s)
莫雷
Advisor
楊沂淵
Subjects
系所名稱：醫學檢驗暨生物技術學系所
Description
學位別：碩士
語文別：英文
指導教授：楊沂淵
口試委員：劉柯俊;吳雪霞
中文關鍵字：外膜蛋白A（OmpA）;大腸桿菌菌株;噬菌體展示技術;多克隆抗OmpA IgY抗體;單鏈可變片段（scFv）抗體。
英文關鍵字：Outer membrane protein A (OmpA);Escherichia coli strain;Phage display technology;Polyclonal anti-OmpA IgY antibodies;Single-chain variable fragment (scFv) antibody.
語文別：英文
指導教授：楊沂淵
口試委員：劉柯俊;吳雪霞
中文關鍵字：外膜蛋白A（OmpA）;大腸桿菌菌株;噬菌體展示技術;多克隆抗OmpA IgY抗體;單鏈可變片段（scFv）抗體。
英文關鍵字：Outer membrane protein A (OmpA);Escherichia coli strain;Phage display technology;Polyclonal anti-OmpA IgY antibodies;Single-chain variable fragment (scFv) antibody.
Abstract
細菌的感染有三分之一的人會造成菌血症，且有時會發展成嚴重的腦膜炎。大腸桿菌是主要造成新生兒和年輕人感染的元兇。然而，預防細菌所引起的感染目前成效不彰。這類的細菌含有一段高度保留的外膜蛋白A與細菌對內皮細胞的附著與侵入有所關係。因此，我們的研究目的為針對大腸桿菌的感染來製備外膜蛋白A的特異性抗體並應用於發展為診斷或治療的試劑。首先，我們將重組外膜蛋白A以肌肉注射方式免疫雞隻來產生多株抗體IgY。在確認有明顯抗外膜蛋白A的反應後，我們利用噬菌體展示技術將免疫後雞的脾臟製備了抗體基因庫來篩選出抗外膜蛋白A的scFv單株抗體。由於相較於傳統的融合瘤技術方便且快速，這項技術對於單株抗體的製備不論是從免疫或是非免疫的動物都已經變成重要的方法了。IgY和scFv抗體的結合能力經由ELISA和西方墨點法都被證實可結合到外膜蛋白A。接著，我們利用這37個單株抗體去辨認不同的外膜蛋白A的片段來確定抗原決定位。我們發現有8個scFv單株抗體會辨認外膜蛋白A胺基酸的1-346、1-287、1-167和60-192的片段。此外，有一個scFv抗體會辨認胺基酸1-287、288-346和21-160的片段。這些結果可推測出這些scFv單株抗體會辨認外膜蛋白A中167-287的氨基酸位置，這段蛋白大小約為13.2 kDa。因此，由於這些製備的scFv單株抗體對於外膜蛋白A有很強的結合能力，這些抗體是很有潛力發展成針對大腸桿菌腦膜炎的檢驗或治療試劑