以胜肽奈米管眼藥水在眼角膜去除後進行抗凋亡基因傳遞研究

角膜表皮細胞受傷所引起的角膜基質細胞凋亡，是眼角膜疾病常見致病原因之一。本實驗利用先前研究出的胜肽奈米管，作為基因傳遞地載體，比較質體DNA在胜肽奈米管形成前與形成後加入，兩種不同混合質體DNA與胜肽奈米管的方式，與質體DNA的結合效果，並利用先前建立的角膜去除造成的角膜損傷模式，給予胜肽奈米管混合治療性質體DNA，評估胜肽奈米管混合質體DNA應用於治療角膜損傷的可行性。由原子力顯微鏡與雷射共軛焦顯微鏡可以觀察到所製出的胜肽奈米管長度約在2 ?慆以下，寬度約在200 nm以下。利用DNA會與胜肽奈米管上的酪胺酸(Tyr)產生交互作用，使用螢光光譜觀察胜肽奈米管與質體DNA的交互作用計算出質體DNA在胜肽奈米管形成後加入的結合常數為2.7x108 M-1，而質體DNA在胜肽奈米管形成前加入的結合常數為1.5x107 M-1。觀察兩種混合方式對DNase的安定性發現，則無明顯地差別。並以原子力顯微鏡與雷射共軛焦顯微鏡觀察到胜肽奈米管以及混合質體DNA的胜肽奈米管的型態。利用螢光顯微鏡觀察經由Thioflavin T 染色的胜肽奈米管投予至健康的裸鼠角膜上，可以觀察到胜肽奈米管穿透進入角膜表皮細胞與角膜基質細胞。在眼角膜去除之後的裸鼠眼角膜上，投予標定了Rhodamine的質體DNA與Thioflavin T標定的胜肽奈米管，利用螢光顯微鏡與雷射共軛焦顯微鏡發現胜肽奈米管與質體DNA亦能穿透進入角膜基質細胞。在傷害過後的裸鼠眼角膜上，給予混合胜肽奈米管和兩種不同抗細胞凋亡機轉的質體DNA(pCMV-Bcl-XL-eGFP和caspase 3 silencing shRNA)，並進行西方墨點法分析與Caspase 3 酵素活性試驗評估。