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台灣金線連之指標成分的定量及其調控果糖誘發高血糖症小鼠之血糖作用的探討
Other Title
Quantification of the index components of Anoectochilus formosanus and study on its blood glucose regulation in fructose-induced hyperglycemic mice
Type
thesis
Date Issued
2012-07-23
Author(s)
陳燕芳
Advisor
何意
Subjects
系所名稱:藥學系(碩博士班)
Description
學位別:碩士
語文別:中文
指導教授:何意
共同指導教授:
口試委員:劉宣良;林淑娟
中文關鍵字:台灣金線連;金線連醣苷異鼠李素;電子順磁共振光譜儀;C57BL/6小鼠;高血糖症
語文別:中文
指導教授:何意
共同指導教授:
口試委員:劉宣良;林淑娟
中文關鍵字:台灣金線連;金線連醣苷異鼠李素;電子順磁共振光譜儀;C57BL/6小鼠;高血糖症
Abstract
中文摘要
隨著飲食習慣的改變,食物的精緻化,導致第二型糖尿病的罹患率上升,其主因多為胰島素阻抗而產生高血糖症,高血糖會增加體內活性氧化物含量,造成體內的氧化壓力上升,近年來已有報告指出氧化壓力容易導致胰島細胞受損,加重胰島素阻抗性。除了飲食以及生活方式的改變能改善胰島素阻抗,許多植物之天然成分已知具有生理活性也能有效地輔助疾病的控制。本研究目的是利用不同處理得到金線連甲醇萃取物,測定其指標成分以及抗氧化物質的含量,並進一步探討利用果糖誘發小鼠產生之高血糖症狀及探討金線連萃取物是否具有調控小鼠血糖之效果。
金線連經甲醇萃取後,再利用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇以及水的不同極性溶媒來分劃,得到水層萃取物比例最高。再利用高壓液相層析來分析指標成分並定量每克粗萃取物含異鼠李素(isorhamnetin)及其醣苷(Isorhamnetin 3-O-β-D glucoside)以及金線連醣苷(kinsenoside)的量,分別為0.044±0.01、0.177±0.12及170.00±16.34 mg/g。金線連的特有醣類結構物質金線連醣苷,由於其水溶性,分佈在正丁醇的部分最多(265.7±24.40 mg/g)。在自由基清除作用方面,利用電子順磁共振法來偵測不同濃度(10 μg/ml~200 μg/ml)金線連乙酸乙酯層的結果,與濃度成正比,濃度上升清除自由基的能力也就上升,在200 μg/ml濃度下具有清除60%自由基的能力。
在動物實驗方面,我們將C57BL/6小鼠分為兩組,控制組為飲水,實驗組為飲用高果糖溶液,果糖誘發小鼠產生肥胖與高血糖症,實驗組小鼠在誘發第5週後空腹血糖值與控制組就有明顯統計上差異(p<0.05),且在第8週實驗組小鼠體重與控制組有明顯統計上差異(p<0.05)。我們在誘發第22週進行葡萄糖耐受試驗,實驗組以及控制組,分別投予食鹽水、金線連萃取物10、25、50 mg/kg與Metformin 50mg/kg。在控制組小鼠投予金線連萃取物和空白組比較血糖濃度曲線下面積並沒有統計上的差異,可知金線連萃取物對正常小鼠的血糖值並沒有影響。在實驗組小鼠中,投予金線連萃取物隨著給藥劑量上升而血糖曲線下面積下降,其中25與50 mg/kg血糖曲線下面積比未投藥組來得小(p<0.001),顯示金線連具有調降血糖之功能,且調降血糖的功能與劑量成正比。投予金線連萃取物50 mg/kg劑量與Metformin 50 mg/kg的曲線下面積沒有統計上差異,顯示兩者調降血糖功能相當。
隨著飲食習慣的改變,食物的精緻化,導致第二型糖尿病的罹患率上升,其主因多為胰島素阻抗而產生高血糖症,高血糖會增加體內活性氧化物含量,造成體內的氧化壓力上升,近年來已有報告指出氧化壓力容易導致胰島細胞受損,加重胰島素阻抗性。除了飲食以及生活方式的改變能改善胰島素阻抗,許多植物之天然成分已知具有生理活性也能有效地輔助疾病的控制。本研究目的是利用不同處理得到金線連甲醇萃取物,測定其指標成分以及抗氧化物質的含量,並進一步探討利用果糖誘發小鼠產生之高血糖症狀及探討金線連萃取物是否具有調控小鼠血糖之效果。
金線連經甲醇萃取後,再利用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇以及水的不同極性溶媒來分劃,得到水層萃取物比例最高。再利用高壓液相層析來分析指標成分並定量每克粗萃取物含異鼠李素(isorhamnetin)及其醣苷(Isorhamnetin 3-O-β-D glucoside)以及金線連醣苷(kinsenoside)的量,分別為0.044±0.01、0.177±0.12及170.00±16.34 mg/g。金線連的特有醣類結構物質金線連醣苷,由於其水溶性,分佈在正丁醇的部分最多(265.7±24.40 mg/g)。在自由基清除作用方面,利用電子順磁共振法來偵測不同濃度(10 μg/ml~200 μg/ml)金線連乙酸乙酯層的結果,與濃度成正比,濃度上升清除自由基的能力也就上升,在200 μg/ml濃度下具有清除60%自由基的能力。
在動物實驗方面,我們將C57BL/6小鼠分為兩組,控制組為飲水,實驗組為飲用高果糖溶液,果糖誘發小鼠產生肥胖與高血糖症,實驗組小鼠在誘發第5週後空腹血糖值與控制組就有明顯統計上差異(p<0.05),且在第8週實驗組小鼠體重與控制組有明顯統計上差異(p<0.05)。我們在誘發第22週進行葡萄糖耐受試驗,實驗組以及控制組,分別投予食鹽水、金線連萃取物10、25、50 mg/kg與Metformin 50mg/kg。在控制組小鼠投予金線連萃取物和空白組比較血糖濃度曲線下面積並沒有統計上的差異,可知金線連萃取物對正常小鼠的血糖值並沒有影響。在實驗組小鼠中,投予金線連萃取物隨著給藥劑量上升而血糖曲線下面積下降,其中25與50 mg/kg血糖曲線下面積比未投藥組來得小(p<0.001),顯示金線連具有調降血糖之功能,且調降血糖的功能與劑量成正比。投予金線連萃取物50 mg/kg劑量與Metformin 50 mg/kg的曲線下面積沒有統計上差異,顯示兩者調降血糖功能相當。