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MicroRNA-34a 在前列腺癌骨轉移角色之研究 Akt活化與Snail 表現的相關性與預測T2前列腺癌手術後復發的可能性 Alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體與癌症化療敏感性關係之研究
Other Title
The role of microRNA-34a in bone metastasis of prostate cancer.
Akt activation correlates with Snail expression and potentially determines the recurrence of prostate cancer in patients at stage T2 after a radical prostatectomy
The study of association between alpha 7-nicotinic acetylcholine receptor and sensitivity of chemotherapy in cancer
Akt activation correlates with Snail expression and potentially determines the recurrence of prostate cancer in patients at stage T2 after a radical prostatectomy
The study of association between alpha 7-nicotinic acetylcholine receptor and sensitivity of chemotherapy in cancer
Type
thesis
Date Issued
2016-07-26
Author(s)
陳威宇
Advisor
陳志榮
劉晏年
Subjects
系所名稱：臨床醫學研究所
Description
學位別：博士
語文別：中文
指導教授：陳志榮
共同指導教授：劉晏年
口試委員：蕭宏昇;武國璋;魏柏立
中文關鍵字：前列腺癌；骨轉移；RAS；WNT訊號傳遞；TCF7；微小核糖核酸；miR-34a ；BIRC5；Snail；磷酸化 Akt；alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體；胃癌；5-Fluorouracil
英文關鍵字：prostate cancer；bone metastasis；RAS；WNT；TCF7；microRNA；miR-34a ；BIRC5；Snail；phosphorylated Akt；alpha 7 nicotinic acethylcholine receptor；gastric cancer、5-Fluorouracil
語文別：中文
指導教授：陳志榮
共同指導教授：劉晏年
口試委員：蕭宏昇;武國璋;魏柏立
中文關鍵字：前列腺癌；骨轉移；RAS；WNT訊號傳遞；TCF7；微小核糖核酸；miR-34a ；BIRC5；Snail；磷酸化 Akt；alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體；胃癌；5-Fluorouracil
英文關鍵字：prostate cancer；bone metastasis；RAS；WNT；TCF7；microRNA；miR-34a ；BIRC5；Snail；phosphorylated Akt；alpha 7 nicotinic acethylcholine receptor；gastric cancer、5-Fluorouracil
Abstract
前列腺癌是常見男性癌症之一，它是美國男性癌症死亡原因的第二位，每年約造成三萬人死亡；在台灣，前列腺癌也是男性癌症十大死亡原因之一，而且前列腺癌的標準化死亡率有逐漸上升的趨勢。前列腺癌因為沒有明顯的症狀，所以許多病人被發現時都已經有遠處器官的轉移，特別是骨轉移；前列腺癌的治療包括手術、荷爾蒙治療、放射線治療與化學治療，阻斷雄性激素對於腫瘤細胞的刺激的賀爾蒙治療是非常重要的治療方式，但這種治療方式最後會因為腫瘤細胞對於雄性激素的依賴性下降而失效。RAS和WNT訊號傳遞的異常活化已經被證明是前列腺癌的骨轉移的重要因素，而且也被認為與雄性激素非依賴性(androgen independence)有關；TCF7是一個WNT訊號傳遞的重要基因，已被認為是在骨轉移的一個關鍵因素；然而， RAS和WNT訊號傳遞在晚期前列腺癌的調控機制仍不清楚。許多微小核糖核酸 (microRNA)被認為是調控WNT-β catenin-TCF7 訊號傳遞的重要因子；在這研究中，我們證明miR-34a參與WNT-β catenin-TCF7 訊號傳遞的調控，TCF7是的miR-34a的一個直接標的，在前列腺癌患者的組織中，miR-34a的表現量與TCF7的表現及WNT訊號傳遞相關基因的表現呈現負相關的情況；在移植瘤動物模式實驗中，異位的miR-34a過度表現可以抑制前列腺癌的骨轉移，並且減少癌細胞增殖。我們也證明了miR-34a可以直接與抗凋亡的基因:BIRC5 的3'UTR結合，進而降低BIRC5的表現；BIRC5的過度表現足以在miR-34a表現高的前列腺癌細胞重新引起抗凋亡的訊號傳導；在前列腺癌患者中，我們發現BIRC5表現與RAS訊號活化的基因表現呈現正相關；RAS訊號活化的前列腺癌細胞中， miR-34a的不足是骨轉移與抗凋亡效果的重要因素，miR-34a的不足會活化WNT訊號傳遞進而誘發TCF7來增加細胞存活，並且藉由和BIRC5的表現來活化抗凋亡訊號傳導途徑。
根除性前列腺切除是早期的前列腺癌的重要治療方式，卻只有很少的因子可以評估手術後的腫瘤復發機會，例如手術切緣是否有腫瘤存在是一項重要的因子；過去我們的研究顯示上皮 - 間質轉化(epithelial mesenchymal transition)的因子: Snail是一個潛在的標記可以預測局限性前列腺癌的復發。 Akt的激活是Snail穩定和轉錄的重要因子，所以我們也再利用前列腺癌手術後的病理檢體來回顧性研究是否活化的Akt（磷酸化Akt）的表現量是否與前列腺癌根治性手術後的腫瘤復發相關？。我們選用前列腺癌經病理檢查確定為侷限於前列腺(T2)而且無手術切緣陽性的標本做磷酸化Akt的免疫染色。我們觀察到磷酸化Akt的表現在前列腺癌比良性組織高，並與Snail的表現呈現顯著正相關。磷酸化Akt的免疫染色評分大於或等於8的病例有較高復發的機會，磷酸化Akt可能可作為一個手術後是否前列腺癌復發的標記。
胃癌是全世界第二常見癌症死亡的原因，大部分胃癌的病人因為沒有症狀，所以在晚期才被發現，但晚期胃癌的治療效果並不理想；5-Fluorouracil (5-FU) 是一種抗代謝藥物，可用來做為治療胃癌，但胃癌細胞會對5-FU產生抗藥性而降低治療效果；在胃癌的研究中，尚未有研究討論alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體在胃癌對於5-FU治療效果的角色，本研究利用小干擾RNA(siRNA)的技術來降低胃癌AGS細胞的alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現，藉由MTT檢驗(細胞存活率分析)、TUNEL檢驗與流式細胞儀檢驗，來討論alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降時，對於5-FU抗增生效果的影響；我們發現在alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降狀況下，胃癌細胞對於5-FU的抗藥性增加，產生凋亡(apoptosis)的細胞減少；我們分析與細胞存活與凋亡(包括pAkt、Akt、Mcl-1、Bcl-2、Bad與Bax)的基因表現，在5-FU作用下的胃癌細胞，細胞存活與抗凋亡的相關基因(包括pAkt、Akt、Mcl-1、Bcl-2)的表現會下降，而促進凋亡的基因(包括Bad與Bax)的表現會上升，但在alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降的狀況下，5-FU處理過的胃癌細胞，其 Bcl-2、Bad與Bax的表現不受影響，這進一步證明alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降會使得胃癌細胞對於5-FU產生抗藥性。
根除性前列腺切除是早期的前列腺癌的重要治療方式，卻只有很少的因子可以評估手術後的腫瘤復發機會，例如手術切緣是否有腫瘤存在是一項重要的因子；過去我們的研究顯示上皮 - 間質轉化(epithelial mesenchymal transition)的因子: Snail是一個潛在的標記可以預測局限性前列腺癌的復發。 Akt的激活是Snail穩定和轉錄的重要因子，所以我們也再利用前列腺癌手術後的病理檢體來回顧性研究是否活化的Akt（磷酸化Akt）的表現量是否與前列腺癌根治性手術後的腫瘤復發相關？。我們選用前列腺癌經病理檢查確定為侷限於前列腺(T2)而且無手術切緣陽性的標本做磷酸化Akt的免疫染色。我們觀察到磷酸化Akt的表現在前列腺癌比良性組織高，並與Snail的表現呈現顯著正相關。磷酸化Akt的免疫染色評分大於或等於8的病例有較高復發的機會，磷酸化Akt可能可作為一個手術後是否前列腺癌復發的標記。
胃癌是全世界第二常見癌症死亡的原因，大部分胃癌的病人因為沒有症狀，所以在晚期才被發現，但晚期胃癌的治療效果並不理想；5-Fluorouracil (5-FU) 是一種抗代謝藥物，可用來做為治療胃癌，但胃癌細胞會對5-FU產生抗藥性而降低治療效果；在胃癌的研究中，尚未有研究討論alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體在胃癌對於5-FU治療效果的角色，本研究利用小干擾RNA(siRNA)的技術來降低胃癌AGS細胞的alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現，藉由MTT檢驗(細胞存活率分析)、TUNEL檢驗與流式細胞儀檢驗，來討論alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降時，對於5-FU抗增生效果的影響；我們發現在alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降狀況下，胃癌細胞對於5-FU的抗藥性增加，產生凋亡(apoptosis)的細胞減少；我們分析與細胞存活與凋亡(包括pAkt、Akt、Mcl-1、Bcl-2、Bad與Bax)的基因表現，在5-FU作用下的胃癌細胞，細胞存活與抗凋亡的相關基因(包括pAkt、Akt、Mcl-1、Bcl-2)的表現會下降，而促進凋亡的基因(包括Bad與Bax)的表現會上升，但在alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降的狀況下，5-FU處理過的胃癌細胞，其 Bcl-2、Bad與Bax的表現不受影響，這進一步證明alpha 7菸鹼型乙醯膽鹼受體的表現下降會使得胃癌細胞對於5-FU產生抗藥性。