結締組織生長因子刺激C6神經膠瘤細胞引發環氧酵素-2表現之機轉探討

中樞神經系統損傷後會伴隨有神經膠變性 (reactive gliosis) 現象，在神經系統內結締組織生長因子 (connective tissue growth factor, CTGF) 被認為組織修復與gliosis有關。而環氧酵素Cyclooxygenase-2，為中樞神經受損時慢性發炎反應之重要指標。然而對於CTGF如何調控中樞系統內慢性發炎反應，目前仍不清楚。在我們的研究結果中顯示，CTGF會以濃度相關性與時間相關性增加COX-2表現及釋放，同時也會依濃度相關性促進COX-2-luciferase活性增加。CTGF可造成C6神經膠瘤細胞中ERK、JNK蛋白產生磷酸化現象；進一步給予PD98059 (MEK抑制劑)及SP600125 (JNK抑制劑)可抑制經CTGF所誘導之COX-2蛋白表現增加及抑制COX-2-luciferase活性上升。而且給予PD98059前處理後，我們可以發現原本CTGF刺激IKKα/β蛋白磷酸化的現象會被抑制。除此之外，再給予PD98059及SP600125前處理，可以發現CTGF誘發κB-luciferase活性上升的現象亦會被抑制。而在使用SB203580 (p38抑制劑)後並沒有觀察到抑制現象外，在給予CTGF對於p38蛋白的磷酸化也無活化作用。另一方面，我們也發現IκB kinase α/β (IKKα/β)、IκBα及NF-κB轉錄因子也都參與在CTGF誘導COX-2表現的訊息傳遞路徑之中。在給予CTGF刺激後，會依時間相關性誘導IKKα/β和IκBα的磷酸化及IκBα蛋白的降解，亦有時間相關性地誘導p65蛋白磷酸化。在前處理PDTC (NF-κB抑制劑)後可抑制CTGF所誘導COX-2蛋白的表現。另外，分別使用κB mutanted-COX-2 promoter及IκBαM轉染進C6神經膠瘤細胞，我們發現CTGF所誘導上升的COX-2-luciferase activity 或COX-2蛋白表現的現象分別會被抑制。最後使用CHIP技術證明CTGF會誘導NF-κB轉錄因子結合至COX-2 promoter region。綜合以上結果發現，在C6神經膠瘤細胞中，CTGF可活化JNK、ERK / IKKα/β/ IκBα訊息傳遞路徑，進而使得NF-κB轉錄因子活化並結合至COX-2 promoter來調控COX-2表現。