抗台灣百步蛇與雨傘節蛇毒蛋白的抗體製備與定性

毒蛇咬傷所造成的高致死率在全世界都是被關注的衛生議題，特別是在熱帶及亞熱帶國家。在台灣，百步蛇 (Deinagkistrodon acutus, DA) 和雨傘節 (Bungarus multicinctus, BM) 是常見的兩種毒蛇。儘管目前由馬匹所製備馬血清是針對毒蛇咬傷最有效的治療方法，但製備成本高且會產生副作用。因此，開發符合經濟效益的替代治療方式是有其研究價值。在我們的研究當中，為了製備多株抗體，我們利用減毒後的蛇毒蛋白進行雞隻免疫，並從雞蛋中純化出多株抗體IgY。純化的IgY抗體對百步蛇和雨傘節的蛇毒蛋白分別都有結合能力且與馬血清效果相似；其效價在雞隻內至少可維持三到六個月。為了篩選出特異性的單株抗體，我們利用噬菌體展示技術 (phage display technology) 建構了四個單鏈抗體 (single chain variable fragment, scFv) 基因庫 (library)，其大小至少有1 × 107以上。經過四次的篩選 (bio-panning) 後，利用噬菌體所做的酵素免疫連結法 (phage-based ELISA) 顯示出特異性的抗體有明顯增加。我們隨機挑選60個有表現scFv的單株抗體並經DNA定序分析後分為不同群。這些單株抗體對於百步蛇或是雨傘節的蛇毒蛋白都有很好的特異性及結合能力。更重要的是，多株抗體IgY有類似於馬血清的中和效果使得老鼠免於百步蛇或是雨傘節的最低致死劑量所造成的死亡。此外，將不同單株抗體混合後也能減緩老鼠因最低致死劑量的蛇毒蛋白所造成死亡的時間。我們相信這些多株IgY以及單株scFv抗體在未來將有機會被應用開發為快速診斷試劑或是取代馬血清的治療方式。