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以超過濾法及串聯質譜儀定量血漿中未結合態與總docetaxel及其藥物動力學之應用
Other Title
Determination of total and unbound docetaxel in plasma by ultrafiltration and LC-MS/MS: Application to Pharmacokinetic study
Type
thesis
Date Issued
2016-01-25
Author(s)
吳珍瑗
Advisor
何秀娥
Subjects
系所名稱：藥學系(碩博士班)
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：何秀娥
共同指導教授：
口試委員：林山陽;林時宜
中文關鍵字：Docetaxel;Paclitaxel;液相層析串聯質譜儀;超過濾;固相萃取;微胞體
英文關鍵字：Docetaxel;chromatography/tandem mass spectrometry;ultrafiltration;solid-phase extraction;micelle
語文別：中文
指導教授：何秀娥
共同指導教授：
口試委員：林山陽;林時宜
中文關鍵字：Docetaxel;Paclitaxel;液相層析串聯質譜儀;超過濾;固相萃取;微胞體
英文關鍵字：Docetaxel;chromatography/tandem mass spectrometry;ultrafiltration;solid-phase extraction;micelle
Abstract
傳統藥品動力學的研究主要藉由監測血中之藥物總體量(total-form)來評估其在體內之吸收、分布、代謝、排泄情形。然而，對與血漿蛋白結合率高的藥物如docetaxel，只有未結合態(unbound-form)的藥物能到達標地(target site)並產生藥理作用(17)。因此，對血漿蛋白結合率高的藥物而言，測量藥物未結合態(unbound-form)的血中濃度，方能準確評估其藥物之動力學、藥效與毒性。
Docetaxel為一從歐洲紫杉醇分離出來的抗腫瘤藥物，其在血漿中易與血漿蛋白結合，結合率大於92%。而具療效者為未結合態。根據研究，以100 mg/m2劑量靜脈注射1~2小時，在25小時後測得病人血中濃度約10 ng/mL，依此計算未結合態約僅0.8 ng/mL或更低。因此，本研究以高感度、高專一性之液相層析串聯質譜儀於電灑游離法正離子(ESI+)模式下，搭配多重反應監控掃描(Multilpe reaction monitoring, MRM)進行分析。血漿樣本先以超過濾(Ultrafiltration)方式分離出未結合態(unbound-form)藥物，再以固相萃取方式進行純化去除基質。以Paclitaxel當內部標準品。所用層析管柱為Kinetex C18, 1.7 μm,100A, 50×2.1 mm; Phenomenex)，移動相為水 (含0.1%甲酸)與乙腈 (含0.1%甲酸) ，流速為0.3 mL/min，以梯度進行沖提，分析時間6分鐘。未結合態Docetaxel在血漿的線性範圍為0.108~10.8 ng/mL，較低定量濃度(LLOQ)為0.108 ng/mL，同日間之精密度(CV)為2.33%~9.21%，準確度(RE)為-11.91%~12.72%;異日間之精密度(CV)為2.41~11.92%；準確度(RE)為-6.13%~6.63%。總Docetaxel在血漿的線性範圍為0.54~216 ng/mL，同日間之精密度(CV值)為3.16%~10.66%，準確度(RE)為-10.32%~10.47%;異日間之精密度(CV值)為3.17~8.74%；準確度(RE)為-11.10%~12.70%。
本研究建立了定量低濃度未結合態Docetaxel的分析方法。並於體外(in vitro)模式找出未結合態DTX與總DTX藥物血中濃度之關係式，CUF=35.03?eCTOT/(776.87+CTOT)。同時以市售品Tynen及4種不同處方之DTX微胞體(micelle)劑型進行體內(in vivo)試驗，檢測出低濃度之unbound DTX，並印證了本實驗室自行研發之B、C、D、E處方微胞體，均能將DTX包覆住，以奈米形式藉由腫瘤血管組織之通透性增強及滯留效應(Enhanced permeability and retention effect, EPR effect)到達腫瘤部位，而抑制腫瘤生長，並使血漿中unbound form較少，以減少副作用並降低毒性。
Docetaxel為一從歐洲紫杉醇分離出來的抗腫瘤藥物，其在血漿中易與血漿蛋白結合，結合率大於92%。而具療效者為未結合態。根據研究，以100 mg/m2劑量靜脈注射1~2小時，在25小時後測得病人血中濃度約10 ng/mL，依此計算未結合態約僅0.8 ng/mL或更低。因此，本研究以高感度、高專一性之液相層析串聯質譜儀於電灑游離法正離子(ESI+)模式下，搭配多重反應監控掃描(Multilpe reaction monitoring, MRM)進行分析。血漿樣本先以超過濾(Ultrafiltration)方式分離出未結合態(unbound-form)藥物，再以固相萃取方式進行純化去除基質。以Paclitaxel當內部標準品。所用層析管柱為Kinetex C18, 1.7 μm,100A, 50×2.1 mm; Phenomenex)，移動相為水 (含0.1%甲酸)與乙腈 (含0.1%甲酸) ，流速為0.3 mL/min，以梯度進行沖提，分析時間6分鐘。未結合態Docetaxel在血漿的線性範圍為0.108~10.8 ng/mL，較低定量濃度(LLOQ)為0.108 ng/mL，同日間之精密度(CV)為2.33%~9.21%，準確度(RE)為-11.91%~12.72%;異日間之精密度(CV)為2.41~11.92%；準確度(RE)為-6.13%~6.63%。總Docetaxel在血漿的線性範圍為0.54~216 ng/mL，同日間之精密度(CV值)為3.16%~10.66%，準確度(RE)為-10.32%~10.47%;異日間之精密度(CV值)為3.17~8.74%；準確度(RE)為-11.10%~12.70%。
本研究建立了定量低濃度未結合態Docetaxel的分析方法。並於體外(in vitro)模式找出未結合態DTX與總DTX藥物血中濃度之關係式，CUF=35.03?eCTOT/(776.87+CTOT)。同時以市售品Tynen及4種不同處方之DTX微胞體(micelle)劑型進行體內(in vivo)試驗，檢測出低濃度之unbound DTX，並印證了本實驗室自行研發之B、C、D、E處方微胞體，均能將DTX包覆住，以奈米形式藉由腫瘤血管組織之通透性增強及滯留效應(Enhanced permeability and retention effect, EPR effect)到達腫瘤部位，而抑制腫瘤生長，並使血漿中unbound form較少，以減少副作用並降低毒性。