白頭翁素抑制人類正常黑色素細胞內酪氨酸酵素活性與酪氨酸相關酵素表現

在黑色素生成步驟裡酪氨酸相關酵素共同參與其反應過程，包含酪氨酸酵素、酪氨酸相關酵素1和酪氨酸相關酵素2。酪氨酸酵素是個含銅的單氧酶，在生成黑色素中進行羥基化與氧化反應此為合成黑色素的速率決定步驟。
本實驗的20種純化合物由天然物分離出來，包含植物、黴菌、海洋細菌與海藻，拿來篩選對黑色素細胞內酪氨酸酵素的活性與抑制黑色素生成的效果。在實驗過程中，一開始化合物在50 µM的濃度時處理正常人類黑色素細胞24小時，得到結果為10種化合物的細胞存活率＞80%。此10種化合物接下來也以50 µM進行對酪氨酸酵素活性的探討。在此步實驗結果顯示，白頭翁素(Anemonin)對酪氨酸酵素的抑制活性能大於50%。
由上述的篩選過程中發現白頭翁素(Anemonin)由厚葉鐵線蓮(Clematis crassifolia Bentham)萃取而來，具有抑制黑色素細胞內酪氨酸酵素的能力其IC50為43.5 µM，當細胞加藥處理48小時，酪氨酸酵素抑制率可高達60%以上。在抑制黑色素生成方面，加藥24小時後對黑色素的生成並無明顯的影響，但持續加藥48小時後黑色素生成可將低約70%左右。
因此在確定黑色素被抑制後進一步的討論白頭翁素對黑色素細胞體內機制的探討，在西方點墨法的結果酪氨酸酵素與相關酵素2的蛋白表現在24小時後都被明顯的抑制，但酪氨酸相關酵素1的蛋白表現在48小時後才有明顯的抑制。以細胞免疫染色法加以觀測細胞內此3種酵素，酪氨酸酵素與酪氨酸相關酵素2在細胞體內的表現是降低的。最後利用即時定量聚合酵素連鎖反應觀察3種酵素的基因表現，白頭翁素確實能減少酪氨酸及其相關蛋白的基因表現。
本實驗結果討論，白頭翁素在影響黑色素的生成原因可能是經由抑制酪氨酸及其相關酵素的基因表現，因此能調控此3種酵素的蛋白表現。白頭翁素對黑色素細胞在不產生細胞毒性之下能夠抑制黑色素的生成，但完整的作用機制尚未明確，希望在未來可以實際運用在化妝品美白的用途上，做為新一代皮膚美白劑。