大果油茶之保肝活性成分研究

根據行政院衛生署於十大死亡原因之統計資料顯示，慢性肝病及肝硬化位居第七位，而在十大癌症死亡原因中，肝癌則位於第二位。有此可知，肝病對國人影響甚鉅。有鑑於此，找尋能有效預防或治療肝炎的藥物仍是相當重要的課題。在本實驗室的保肝藥物活性篩選中，發現大果油茶葉萃取物具有開發的潛力。而台灣坊間最常取大果油茶的種子榨油作為整腸健胃，其葉部卻鮮少被使用或研究，因此本論文以探討其葉部保肝活性主成分為主。保肝活性之評估以抑制氯化亞鐵誘導小鼠肝均質液及粒線體產生脂質過氧化為體外試驗模式，結果發現大果油茶葉70 %丙酮萃取物具有明顯抗脂質過氧化活性。體內試驗中，以四氯化碳誘導小鼠造成急性肝損傷的動物模式，發現大果油茶葉70 %丙酮萃取物可明顯降低血清GOT、GPT數值。此外，大果油茶葉萃取物可回復因四氯化碳所降低之CYP2E1蛋白質表現。 然而我們也大量採集及萃取大果油茶葉並以抗脂質過氧化為活性追蹤之依據，應用管柱色層分析技術進行活性成分之分離，得到九個化合物(1-9)，分別進行1H -NMR、13C-NMR、2D-NMR、MS等儀器分析鑑定為：(+)-catechin (1)、rutin (2)、quercetin (3)、4'-hydroxy-3,5 -dimethoxybibenzyl (4)、β-sitosterol (5)、4'-β-D-glucopyranosyloxy-3,5 -dihydroxybibenzyl (6)、lupeol (7)、和3-β-D-glucopyranosyloxy-4',5 -dihydroxybibenzyl (8)，kaempferol (9)。其中化合物6和8為新的化合物，化合物4則是第一次從天然物中分離出。其中以quercetin的抑制作用最佳(IC50：7.10 ?g/ml)，其次為(+)-catechin、kaempferol、4'-hydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl。在四氯化碳誘導大鼠初代培養肝細胞損傷之保護作用試驗中，發現大果油茶葉萃取物及quercetin、(+)-catechin、kaempferol均有良好的抑制作用且具有劑量依存性，但4'-hydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl於三種劑量下皆無抑制作用。在清除DPPH自由基試驗中，仍以quercetin的效果最佳，其次為： kaempferol、(+)-catechin和rutin，由此結果可知其可藉由提供氫原子而達到清除自由基之目的。然而在螯合亞鐵離子的試驗中發現它們的螯合能力均不顯著。此外亦將大果油茶葉活性成分quercetin、(+)-catechin進行保肝活性之體內試驗，發現皆可明顯降低小鼠血清GOT、GPT數值。此外，其也可回復因四氯化碳所降低之CYP2E1蛋白質表現，其保肝作用應藉由增加CYP2E1蛋白質含量，以降低四氯化碳被代謝活化。綜合上述結果，quercetin、(+)-catechin為大果油茶最主要之保肝活性成分。