利用二維高效液相層析儀同時分析心衰竭病人血液與尿液中乳酸和3-羥基丁酸的鏡像異構物

心臟衰竭被認為是心肌與骨骼肌能量來源利用改變的系統性疾病。過去研究指出在心衰竭病人中不只其乳酸濃度會上升，另一方面酮體的代謝也會增加，而3-羥基丁酸則大約佔酮體中70%。而受限於分離技術的缺失，過去研究都著重於分析總乳酸與3-羥基丁酸濃度，因此乳酸與3-羥基丁酸鏡像異構物與心臟衰竭的關聯仍不清楚。
此篇論文主要利用二維高效液相層析儀(2D-HPLC)同時分析心衰竭病人血液與尿液中乳酸(lactate)和3-羥基丁酸(3-hydroxybutyrate)鏡像異構物。將檢品加入螢光衍生化試劑4-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-COCl)，並將混合樣品置於60℃下加熱15分鐘進行螢光衍生化反應，之後取25 μL反應後檢品注入高效液相層析儀分析。在第一維的高效液相層析儀中，使用毛細管管柱(0.53 x 1000 mm)以包含0.05%甲酸的10-25%乙腈水溶液為移動相進行梯度分離，乳酸與3-羥基丁酸的滯留時間分別為135分鐘及155分鐘。而在第二維的高效液相層析儀中，測試數種固定相之管柱及不同比例乙腈、甲醇及三氟乙酸所組成之移動相，進行分離效果的測試。結果顯示利用KSAACSP-001R管柱搭配含0.1%三氟乙酸之5:95乙腈:甲醇溶液為移動相分析乳酸鏡像異構物有最佳分離效果；另一方面使用KSAACSP-001S管柱搭配含0.005%三氟乙酸之25:75乙腈:甲醇為移動相分析3-羥基丁酸鏡像異構物有最佳分離效果。最後將此方法應用在同時分析心臟衰竭病人血液與尿液檢品中的乳酸及3-羥基丁酸之鏡像異構物。相較於健康受試者，在心衰竭患者尿液中D/L-乳酸比例(0.61%)有顯著上升(p< 0.05)；而L/D-3-羥基丁酸比例(0.09%)有顯著下降(p<0.05)。未來期望此方法可應用在分析更多心衰竭患者檢體並進一步釐清乳酸及3-羥基丁酸之鏡像異構物在心衰竭之生理活性與作用機轉。