抗流行性感冒病毒(H1N1)天然藥物之探索-訶子

本研究為尋求抗流行性感冒病毒(H1N1)藥物，進行訶子成分之分離及抗病毒活性測試，追蹤其有效活性成分。研究內容包括：一、化學探討- 由含水丙酮萃取物，經由大孔吸附樹脂、多葡糖聚脂及逆相層析等管柱，分離出 [1] Phenolcarboxylic acid: gallic acid (1), protocatechuic acid (2), chebulic acid (3)。 [2] Glloylglucoses: 1,6-di-O-galloyl-β-D-glucopyranose (4), 1,3,6-tri-O-galloyl-β-D-glucopyranose (5), 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose (6)。 [3] Galloylshikimic acids: 4-O-galloylshikimic acid (7), 5-O-galloyl shikimic acid (8)。 [4] Ellagitannins: casuariin (9), chebulanin (10), corilagin (11), chebulagic acid (12), chebulinic acid (13), castalagin (14) 等十四個化合物。 二、抗H1N1流感病毒活性MTT測試- [ I ] 藥物及流感病毒同時加入細胞培養測試，以1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose(6)抗病毒活性最優，其細胞存活率為144.5 %，高於ribavirin (105.0 %)的效果，MIC值與正對照組ribavirin同為12.5 μg/ml，其次為chebulinic acid (13), 131.8 % ，MIC值為25 μg/ml。 [ II ] 加入藥物1小時後，再加入流感病毒。 在沒有藥物的保護作用之下，其細胞受病毒感染後，細胞存活率為8.5 %，而1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-?nβ-D-glucopyranose (6), 135.9 % 和chebulinic acid (13), 134.1 %之抗病毒活性最好，其細胞存活率比正對照組ribavirin, 112.6 %高。在細胞存活率的數據顯示，本組實驗之MIC以1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose效果最好為12.5 μg/ml，和ribavirin一樣。[ III ] 加入病毒一小時後，再加入藥物，評估治療效果。在沒有任何藥物的保護作用之下，其細胞受病毒感染後，細胞之存活率為7.9 %，正對照組ribavirin為111.6 %， 而所試驗之化合物中以chebulagic acid (12), 126.9 % 和chebulinic acid (13), 120.7 % 治療性抗病毒作用最好，高於ribavirin的作用，其次1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose(6)和castalagin (14)的細胞存活率分別為109.2 % , 110.8 % ，和ribavirin的效果一致。正對照組ribavirin之MIC為12.5 μg/ml，而以上四個有效化合物之MIC均為25 μg/ml。 結論：(1) 由化學結構與活性相互關係之探討得知，多酚性化合物對流行性感冒病毒(H1N1)之抑制、預防及治療作用，以1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-?nβ-D-glucopyranose (6) 及chebulinic acid (13)呈現最顯著之抗病毒作用。同時，取代之galloyl或chebuloyl等acyl group，總數目之多寡將影響其活性之大小。 (2) 依化學結構分類，小分子之Phenolcarboxylic acid類化合物僅以protocatechuic acid (2)之作用較佳；Glloylglucoses類化合物則以接五個galloyl基之1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose (6) 抗H1N1病毒效果最好；Galloylshikimic acids類之抑制H1N1病毒作用不明顯；Ellagitannins類化合物呈現最佳之抗H1N1作用，但糖基上若有兩個以上之OH基未接取代基時，其作用顯著下降。