Simiduia agarivorans SA1T所產蛋白酶之純化與特性探討

Simiduia agarivorans SA1T 具良好蛋白酶活性，本研究對此菌株所產生的蛋白酶進行分離、純化並探討該酵素的一般性質。探討最佳化培養條件顯示，使用250 mL具凹槽錐形瓶，添加 0.75% tryptone peptone、pH 7.8、培養液 50 mL、25 °C 下，震盪培養 72 小時後，蛋白酶的活性最佳。粗酵素液經由硫酸銨沉澱、透析、並以SDS-PAGE單離出分子量約 120 kDa 的蛋白酶，其最適反應溫度和 pH 分別為 60 °C，和 pH 9；在溫度 4-37 °C 及 pH 8下，酵素有良好穩定性；當超過 37 °C， 則蛋白酶無法穩定維持活性。此蛋白酶在 5 mM 酵素抑制劑 phenylmethanesulfonylfluride (PMSF) 的作用下活性明顯受到抑制，由此推測此酵素為絲胺酸型蛋白酶 (serine type protease) 。在界面活性劑影響方面，此蛋白酶在 SDS 含量超過 0.5% (g/mL) 時活性開始降低，SDS 濃度增至 2% 時活性完全受到抑制。在金屬離子影響方面， 5 mM 的 Mg2+ 和 Ca2+ 會提高蛋白酶的活性，而 Hg2+、Ni2+ 和 Cu2+ 則會降低蛋白酶活性。蛋白酶活性表現在 1.25% (w/v) NaCl下活性最佳，在 2.5% NaCl 下則不具耐受性；蛋白酶與基質液 (酪蛋白) 反應的最佳濃度為12.5 mg/mL。