二氫比叮誘發牙齦增生與健康個體之纖維母細胞受牛樟芝複方降低 IkB/NF-κB活性之影響

牙周病是一種全球人類人口腔中普遍流行的口腔發炎疾病，起因爲口腔清潔不良造成口內生物膜堆積引起宿主一連串的發炎反應，其調控發炎反應的細胞激素、免疫系統、全身系統性疾病與個體行為如：抽菸、藥物服用有關。無論如何，牙周病已被確定為一種機轉複雜的炎性疾病。牛樟芝(Antrodia cinnamomea, AC)為台灣特有傳統藥材，近期研究證實牛樟芝萃取物雖然有細胞毒性，在適當濃度下仍然具有抗發炎與抗氧化的能力。
我們希望藉由本次實驗觀察，於非活體實驗中，使用健康人類牙齦纖維母細胞與dihydropyridine induced gingival overgrowth （DIGO）細胞，分別於實驗中刺激引起發炎反應，分析IL-1β//NF-κB路徑在AC作用下的表現，觀察AC是否能有效抑制人類牙齦纖維母細胞的發炎反應。本次實驗經臨床手術取得健康牙齦與DIGO牙齦組織，篩選純化成人類纖維母細胞後培養，兩種樣本分別分成四組：控制組、IL-1β組、AC組、IL-1β+AC組，DIGO樣本額外加入兩組：Nifedipine+IL-1β組、Nifedipine+IL-1β+AC組。細胞培養至固定數量後萃取其蛋白質與RNA，並透過西方墨點法與反轉錄聚合酶鏈式反應分析，再使用student t 測驗統計檢定。實驗結果發現，反轉錄聚合酶鏈式反應分析結果得知，無論在健康細胞或DIGO細胞中，IkB相關RNA單元序列（IkB-α、IkB-β、IkB-ε）和NF-κB相關RNA單元序列（Rel A、Rel B、cRel A），統計上並無觀察到顯著差異。西方墨點法分析DIGO樣本，IL-1β組與IL-1β+AC組的IkB蛋白質表現量低於控制組與AC組（p<0.05）；在pIkB/IkB比率，也發現IL-1β組與IL-1β+AC組磷酸化比例高於控制組與AC組（p<0.05），而且IL-1β組明顯高於IL-1β+AC組。Nifedipine+IL-1β組的比率也高於Nifedipine+IL-1β+AC組（p<0.05）；在NF-κB相關蛋白質 p50表現量中可觀察到，IL-1β組明顯高於控制組與AC組（p<0.05），此外在健康樣本中加入AC，於四組間統計並無顯著差異。
經由本實驗得知，AC可能透過抑制IkB磷酸化的作用，可以有效降低DIGO細胞的pIkB/IkB比率，達到調控DIGO細胞發炎反應的作用。而AC在健康樣本中，並無觀察到顯著差異。