探究Znf179的分子功能

腦指蛋白Znf179 在神經發育及分化的過程中扮演重要的角色，由於Znf179 的結構包含C3HC4 環指區域，此區域為E3 泛素連接酶重要的結構特徵，並且在我們的研究結果發現，在293T 細胞過度表達Znf179，會增加內生性蛋白的泛素化，顯示Znf179 可能具有E3 泛素連接酶的活性。在本研究中我們發現，藉由細胞內以及細胞外實驗觀察到Znf179 具有自我泛素化的現象；並且我們也發現會與Znf179 結合的E2，包含 UbcH2、UbcH3、UbcH5b、UbcH6 以及UbcH8，顯示Znf179 可能有E3 泛素連接酶的活性。先前的研究利用yeast two-hybrid 篩選結果發現，PLZF (promyelocytic leukemia zinc finger 早幼粒細胞白血病鋅指蛋白，a kruppel-like zinc finger gene) 會與Znf179 結合，我們亦利用免疫沉澱實驗進一步確認兩者交互作用的關係，且進一步發現，表現 PLZF 會促進Znf179 以及內生性蛋白的泛素化。此外，在先前研究發現一些E3 連接酶，像是parkin，能夠調
控蛋白酶體(proteasome)的活性。因此，我們利用一個泛素融合螢光蛋白GFP 報
導性載體（UbG76V-GFP）探討Znf179 是否能夠調控蛋白酶體(proteasome)的活性。實驗結果發現，Znf179 會促使UbG76V-GFP 表現量下降，顯示Znf179 會促進26S蛋白酶體的活性；我們亦發現Znf179 剔除小鼠與正常小鼠相較，26S 蛋白酶體相關的蛋白(20,19 次單元) PSMA1、PSMC6 以及PSMD10 表現量明顯減少，而在293T 細胞中過度表現Znf179 蛋白，26S 蛋白酶體中的20S 次單元PSMA1 與PSMB4 以及19S 次單元的PSMC6 表現量上升，這些結果顯示Znf179 可以藉由透過調節蛋白酶體次單元的表現量來調控其活性。綜觀上述結果，我們初步發現Znf179 具有E3 泛素連接酶活性，而PLZF 會促進Znf179 及內生性蛋白的泛素化，扮演一載體蛋白的角色。而Znf179 能透過調節26S 蛋白酶體的次單元蛋白表現量進而影響到26S 蛋白酶體的活性。