雞源抗蛇毒抗體的鑑定瑪家山龜殼花

毒蛇咬傷在全球一直是很重要的醫學議題。Ovophis makazayazaya (OM) 也稱為瑪家山龜殼花，是台灣常見的毒蛇之一，會分泌出血性蛇毒蛋白(OM蛋白)。隨著瑪家山龜殼花咬傷病例數量持續增加，治療方式變得非常重要。然後，目前還沒有針對瑪家山龜殼花咬傷的特異性抗蛇毒血清。此外，傳統利用馬開發特定的抗蛇毒血清除了成本高昂也容易具有像是血清疾病等潛在的副作用。本研究旨針對 OM 蛋白開發生產一種經濟實惠的抗蛇毒血清治療策略。我們以減毒OM蛋白對母雞進行免疫來製備多株抗體IgY。從蛋黃中純化的IgY抗體顯示出對OM蛋白具有特異性結合能力，且雞隻的免疫反應持續至少五週。接著透過噬菌體展示技術我們建構了兩個具有短鏈和長鏈的單鏈抗體(scFv)基因庫，其大小分別為1.6 × 106和5.5 × 105。經過兩次四輪篩選(bio-panning)後，elution噬菌體和噬菌體ELISA 上的訊號都有增加的趨勢。我們隨機挑選52個表現的scFv抗體進行序列分析，第一輪篩選可分為11群短鏈和1群長鏈；第二輪篩選可分為12群短鏈和2群長鏈。在這些抗體當中，四個scFv包含cOML1、cOM2S3、cOM2L1和cOM2L11 的在 ELISA 上對OM蛋白的具有結合力，但在西方墨點法(Western blot)上沒有結合訊號。此外，在ELISA上發現cOM2S3和cOM2L11與其他台灣常見的蛇毒蛋白具有交叉結合反應；而cOML1和cOM2L1只專一性對OM蛋白具有結合力。這四種 scFv 抗體也經過His-tag純化並用於效價(titration)和競爭型 ELISA分析，進而確認它們親和力。此外，IgY和scFv 在血液瓊脂培養基上顯示出對 OM 引起的溶血具有抑製作用。因此，使用雞和噬菌體展示技術生產多株IgY和單株scFv的中和性抗體既符合經濟效應，也可應用於未來的診斷和治療試劑。