以SH-SY5Y細胞模式與東莨菪鹼誘導動物模式探討白藜蘆醇與其結構類似物之神經保護作用

白藜蘆醇在許多研究中已證明擁有抗氧化、抗發炎和改善認知方面的問題。本研究想要探討白藜蘆醇的類似物是否也擁有相似的功能，因此首先以白藜蘆醇與其結構的類似物以體外模式探討抗氧化、抑制蛋白質醣化反應、乙醯膽鹼酯酶與單胺氧化酶B抑制活性，抑制脂多醣誘導一氧化氮生成、抑制甲基乙二醛誘導神經細胞死亡；以東莨菪鹼誘導類似阿茲海默症認知行為退化動物模式，評估潛力化合物認知行為改善活性。先測試化合物抑制乙醯膽鹼酯酶抑制活性，結果顯示化合物No.1、No.4、No.6和No.7具有較佳的乙醯膽鹼酯酶抑制活性 (No.7 ? No.6 > No.4 > No.1) ;化合物No.1~No.8具有較佳單胺氧化酶B抑制活性；以牛血清蛋白 (BSA)和甲基乙二醛 (MGO)為蛋白質醣化模式，結果顯示，化合物No.6~No.10皆具有抑制生成argpyrimidine活性。依上述實驗結果，選取其中的No.1、No.4、No.6和No.7繼續進行DPPH自由基和氫氧自由基清除實驗。結果顯示，清除DPPH自由基活性依序為No.6 > No.4 > No.7 ? No.1 ; 清除氫氧自由基 (以電子自旋共振儀測定)活性依序為No.1 > No.6 ? No.7> No.4；在抑制脂多醣誘導一氧化氮生成活性依序為No.6 > No.1? No.4 > No.7。以SH-SY5Y神經細胞為模式，抑制甲基乙二醛誘導神經細胞死亡活性，顯示No.1 (2.5 μM)、No.4 (2.5 μM)、No.6 (1 μM)、No.7 (1 μM)具有的保護作用。利用DCFH-DA 為探針，分析細胞內氧化壓力狀態，結果顯示No.1、 No.4、 No.6 和No.7在1 μM時具有降低SH-SY5Y神經細胞活性氧物質的能力。在以東莨菪鹼誘導類似阿茲海默症認知行為退化動物模型實驗中，短期試驗分為兩次，第一次餵食化合物濃度為20 mg/kg，第二次餵食化合物濃度為40 mg/kg。在實驗前一小時，用管餵方式給予No.4、No.6 and No.7，給予化合物半小時後i.p.注射東莨菪鹼 1 mg/kg，利用水迷宮試驗來判定小鼠的學習記憶能力，以小鼠在目標象限所待的時間長短和小鼠進出目標象限的次數來評估記憶與學習的能力，第一次試驗的結果只有No.6有統計上的意義 (P <0.05)。第二次短期試驗的結果為No.4、No.6和No.7 有統計上的意義 (P <0.01)。在被動迴避評估記憶學習試驗中，No.4、No.6和No.7 與control組相比，停留在明室時間有統計上的意義 (P <0.01)。在長期的水迷宮評估記憶學習試驗中，No.6和No.7 在目標象限所待的時間及進出目標象限的次數與control組相比在統計上有意義 (P <0.01)。最後在動物腦組織萃取物之生化活性測定的結果顯示，No.6 (P <0.01)和No.7 (P <0.05)的乙醯膽鹼酯酶活性比control組低，由體外試驗與體內動物試驗的結果，可以推測No.6可能是有改善認知行為退化的活性，而其相關的機制需要再進一步的研究探討。