抗人類癌症細胞表面之α-異烯醇酶多株與單株抗體的製備與定性

異烯醇酶，也稱為磷酸丙酮酸水合酶，是種在許多生物種都豐富表達的細胞質蛋白之一，它會催化2 - 磷酸甘油酸變成磷酸烯醇丙酮酸，是分解代謝糖類途徑最後步驟的的關鍵糖解酵素酶。
在腫瘤細胞中，異烯醇酶可促使細胞經由糖解作用進行厭氧增殖（又稱Warburg效應），有時表現在細胞表面，進而促使癌細胞的侵襲。在本文中，我們利用大腸桿菌表現和純化hENO1重組蛋白，將其表現與大量地純化出來，用這些重組的hENO1重組蛋白免疫雞隻。經過四次免疫過後，產生高效價的IgY 抗體反應，將多株抗體稀釋到32000倍皆還有反應。這些多株抗體利用 Western blot、ELISA偵測也都顯示它們對於hENO1 蛋白有特異性的結合能力。接著從免疫過後雞隻的脾臟B細胞，製作針對hENO1的單株抗體，利用噬菌體展示技術建立了兩種重組抗體片段(single chain variable fragment, scFv)基因庫(library)。我們也利用噬菌體展示技術構建兩個抗體基因庫short linker和 long linker分別具有7.8×107與5.4×107 的複雜度，並且進一步地，利用此兩個基因庫來篩選出對hENO1有特異性結合的單株抗體。經過三輪篩選選擇，再隨機挑選表達單株抗體，定序出來的結果short和 long linker皆篩出七群單株抗體。接著用西方墨點法篩選出可以辨認細胞hENO1單株抗體後，以流式細胞儀及螢光免疫染色法進行單株抗體的結合能力測式，其中以hEn S7及hEn S8結合能力最好。在細胞生長抑制實驗也可以發現，此兩株單株抗體對肺癌細胞A549和PE089及肝癌細胞HepG2215生長確實有抑制的效果，經過四天作用hEn S7抑制率分別最高可達46.2%、45.6%、60%，hEn S8抑制率分別最高可達54.9%、58.4%、68.3%。最後以NOD/SCID小鼠進行動物模擬實驗，也發現其篩出之單株抗體可以抑制小鼠體內肝癌細胞HepG2215的生長速率，抑制率最高可以達50%左右。總之，我們認為這些IgY多株抗體和scFv單株抗體可能可以應用在分子診斷劑和治療劑的開發，在未來可以對相關的癌症有幫助。