CD69於CML細胞生長、死亡及分化的角色

Chronic myelogenous leukemia(CML)是造血幹細胞不正常增生的疾病，因chromosome translocation t(9;22)產生Philadelphia(Ph) chromosome；Ph chromosome會產生Bcr-Abl fusion gene，進而製造持續活化的tyrosine kinase，Bcr-Abl蛋白質，是造成CML主要致病因子。 Bcr-Abl活化許多訊息傳遞路徑而促進CML細胞的增生、抑制細胞凋亡及分化。本實驗室先前篩選到CD69 蛋白質表現於未分化的CML細胞株K562，因此欲探討CD69是否為Bcr-Abl的下游蛋白質以及CD69在CML細胞中所扮演的角色及功能。首先，利用大量表現Bcr-Abl的穩定細胞株發現，Bcr-Abl可能會透過MEK pathway及NF-κB pathway而活化CD69 promoter activity，所以CD69為Bcr-Abl的downstream protein。此外，利用transient transfection以及Western blot assay的方式證明Bcr-Abl會透過NF-κB與c-jun (AP-1)活化CD69 promoter activity及CD69蛋白質表現量。為了證實CD69參與Bcr-Abl的訊息傳遞，建立大量表現CD69的穩定細胞株(K562-CD69K#2、#3、#4)後，Western blot結果顯示在大量表現CD69的穩定細胞株中發現有蛋白質tyrosine phosphrelation的訊號增加，接著以CD69 monoclonal antibodies(mAbs) crosslinking活化CD69後，蛋白質tyrosine phosphrylation的訊號明顯高於isotype mAbs (IgG)組別，利用目前治療CML最主要的藥物STI571 (Signal Transduction Inhibitor-571；Bcr-Abl tyrosine kinase的inhibitor) 探討細胞的功能性，STI571會造成CML細胞大量進行apoptosis，且與Activin A同樣會誘導K562的erythrocyte分化。實驗結果顯示，大量表現CD69之穩定細胞株無論在有無CD69 monoclonal antibodies(mAbs) crosslinking下，處理STI571或Activin A後皆明顯增加K562細胞的生長活性及抑制細胞凋亡與分化，由上述得知，CD69在CML細胞中可能扮演著增加細胞生長及抑制細胞凋亡與分化的角色，未來會利用siRNA更進一步去證實CD69對CML細胞的生長、凋亡及分化的影響。