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利用二維高效液相層析儀同時分離乳酸與3-羥基丁酸鏡像異構物
Other Title
Development of a two-dimensional HPLC system for the simultaneous determination of lactate and 3-hydroxybutyrate enantiomers
Type
thesis
Date Issued
2014-06-23
Author(s)
劉書伶
Advisor
許秀蘊
李仁愛
Subjects
系所名稱：藥學系(碩博士班)
Description
學位別：碩士
語文別：中文
指導教授：許秀蘊
共同指導教授：李仁愛
口試委員：方嘉佑;蔡東湖;李宗徽
中文關鍵字：乳酸;3-羥基丁酸;鏡像異構物分離;高效液相層析儀
語文別：中文
指導教授：許秀蘊
共同指導教授：李仁愛
口試委員：方嘉佑;蔡東湖;李宗徽
中文關鍵字：乳酸;3-羥基丁酸;鏡像異構物分離;高效液相層析儀
Abstract
此篇論文主在建立以二維液相層析儀同時分離乳酸 (Lactate)與3-羥基丁酸 (3-Hydroxybutyrate)鏡像異構物。將螢光衍生化試劑
4-(N-Chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-COCl)加入含有乳酸以及 3-羥基丁酸的溶液，將混合液置於60˚C 下加熱 15 分鐘，進行螢光衍生化反應後取 20 μL 注入液相層析
儀。在第一維的液相層析儀中，利用 capillary monolithic ODS 管柱可以成功分離乳酸與 3-羥基丁酸。在第二維的液相層析儀中利用QD-AX、KSAACSP-001S 管柱及不同比例之氰甲烷、甲醇與三氟乙酸所組成的移動相，來進行乳酸與 3-羥基丁酸鏡像異構物的分離。所得之最佳分離係數分別是 1.14 與 1.08，偵測極限(LOD)大約為 2 微毫莫爾 (2 fmol/inj)。利用此方法成功定量了生物檢體，如在健康人的血漿、尿液以及唾液中發現，無論是乳酸或是 3-羥基丁酸的鏡像異構物均存在人體中。未來此方法可望應用在釐清乳酸與 3-羥基丁酸的鏡像異構物與疾病之間的關聯性與其個別的生理意義。
4-(N-Chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-COCl)加入含有乳酸以及 3-羥基丁酸的溶液，將混合液置於60˚C 下加熱 15 分鐘，進行螢光衍生化反應後取 20 μL 注入液相層析
儀。在第一維的液相層析儀中，利用 capillary monolithic ODS 管柱可以成功分離乳酸與 3-羥基丁酸。在第二維的液相層析儀中利用QD-AX、KSAACSP-001S 管柱及不同比例之氰甲烷、甲醇與三氟乙酸所組成的移動相，來進行乳酸與 3-羥基丁酸鏡像異構物的分離。所得之最佳分離係數分別是 1.14 與 1.08，偵測極限(LOD)大約為 2 微毫莫爾 (2 fmol/inj)。利用此方法成功定量了生物檢體，如在健康人的血漿、尿液以及唾液中發現，無論是乳酸或是 3-羥基丁酸的鏡像異構物均存在人體中。未來此方法可望應用在釐清乳酸與 3-羥基丁酸的鏡像異構物與疾病之間的關聯性與其個別的生理意義。