梁有志李昆霖2026-05-082026-05-082007-07-18https://203.71.86.71/handle/123456789/12157https://hdl.handle.net/11296/j25zq7學位別：碩士 語文別：中文 指導教授：梁有志 共同指導教授： 口試委員：葉添順 ;陳建和 中文關鍵字：變異型目前，已有五種屬於生長抑制蛋白家族(inhibitor of growth)的成員被 確定出來，它們在蛋白結構的C 端都各自擁有高保留性的plant homeodomain (PHD) finger motif，此外家族本身也被人發現可以接合和 活化一些造成histone 乙醯基化或是去乙醯基化的蛋白質複合體 (HAT/HDAC complexes)，以調節基因染色質的結構進而調控基因的轉錄 活性。ING4 是家族的一員，並具有一些腫瘤抑制基因的特性，其特性 包括藉由與p53、NF?羠、HIF-1?捄氐鉯?因子的結合去控制血管新生、接 觸抑制等癌症惡化的現象。最近的研究發現ING4 擁有四種序列差異很 小的變異型可能是由於轉錄初產物的剪接失誤造成，不同的變異型對細 胞的生長速度、型態有著不同的影響，本文對這四種ING4 是依照胺基 酸在序列中減少的數目命名為ING4-d0、-d1、-d3、-d4。 首先，本研究利用RT-PCR 的方式從BALB卅C 小鼠的睪丸組織中， 獲得兩種ING4 變異型的cDNA(ING4-d1 及ING4-d4)，我們以定點突變 的方式獲得剩下兩種ING4 分別是ING4-d1 及ING4-d3。之後，將四種 ING4 接在可經tetracycline 誘導表現的載體(Tet on system)，再轉殖到 MCF-7 細胞中，經抗生素的篩選後，挑出可穩定表現單一變異型的細胞 株。接著分析其對腫瘤細胞的影響，我們發現各種ING4 的表現，並不 會影響人類乳腺癌生長與細胞週期的分布。以西方墨點法及螢光顯微鏡 分析，發現大部分的ING4- d0、ING4- d1 只侷限於細胞核內，而ING4- d4 有部份存在於核外。另外，將純化後具有磷酸化活性的Cdk2/4 與純 化的ING4- d0 與ING4- d4 反應，進行放射線激酶活性分析，發現Cdk2/4 可磷酸化ING4- d0 及ING4- d4，但磷酸化的程度，沒有差異。最後，我們偵測雌性素所誘導的cyclin D1 表現，是否會因加入各種不同的 ING4 而有所影響，實驗發現cyclin D1 的表現量會因為ING4-d0 在細胞 內的增加而有些許下降的趨勢，但有趣的是ING4-d1 及ING4-d4 不會影 響cyclin D1 的表現。總結，我們認為無論是野生型的ING4 或是剪接的 變異型，對人類乳腺癌細胞的增生、細胞週期及cyclin D1 的表現都沒 有明顯的影響。系所名稱:醫學檢驗生物技術學研究所thesis