林景堉陳威戎龔庭萱2026-06-112026-06-112016-06-29https://203.71.86.71/handle/123456789/57626學位別：碩士 語文別：中文 指導教授：林景堉 共同指導教授：陳威戎 口試委員：張哲菖;鄭朝文;廖辰中 中文關鍵字：風濕性關節炎;丙二醛;自體抗體同型;血清 英文關鍵字：Rheumatoid arthritis;Malondialdehyde;Autoantibody isotypes;Serum類風溼性關節炎 (Rheumatoid Arthritis) 是一種慢性的自體免疫疾病，經統計目前類風溼性關節炎約影響全世界百分之一的總人口數，且發生率和死亡率都還在上升的趨勢，所以在類風溼性關節的致病機轉以及檢測治療上的研究都是重要的課題之一。氧化壓力於發炎的關節內產生自由基，會誘發自體免疫破壞結締組織導致類風濕滑膜炎。在類風溼性關節炎的致病因素的探討上，我們鎖定的研究主軸為丙二醛 ( Malondialdehyde, MDA) ，丙二醛在氧化壓力下不飽和脂肪酸過氧化的最終產物，在多項研究中指出丙二醛蛋白質加成物具高免疫原性可能引發多項的疾病產生。流行病學統計中，類風濕性關節炎的風險包括年齡、性別、種族、類風濕因子（RF）或抗核抗體、遺傳異質性、環境因素和吸煙。 檢體使用90個女性血清樣本 (45個類風濕性關節炎患者與45個年齡配對健康控制組)。我們挑選9對檢體探討血清中特定的丙二醛修飾胜肽，經過刀豆素A親和層析法、一維凝膠電泳和奈米級液相層析串聯質譜從血清樣品中篩選候選的丙二醛-胜肽加成物，鑑定出5個表現量有差異的丙二醛-胜肽加成物，選擇使用差異兩倍以上之丙二醛-胜肽加成物進行測試。挑選20對檢體，以西方墨點法和免疫沉澱法檢驗類風濕性關節炎血清與健康控制組中丙二醛-胜肽加成物其蛋白質量。再以免疫酵素連結反應檢測45個類風濕性關節炎患者與45個年齡配對健康控制組之血清丙二醛量、丙二醛-胜肽加成物量及自體抗體同型分析。 鑑定出的5個表現量有差異的丙二醛-胜肽加成物中，差異2倍以上的丙二醛-胜肽加成物有4個 [ Ig kappa chain C region (IGIK)、alpha-1-antitrypsin (A1AT)、alpha-2-macroglobulin (2M)、apolipoprotein B-100 (ApoB-100) ]。在血清蛋白質的表現量上，這四個丙二醛-胜肽加成物在類風濕性關節炎患者和健康控制組沒有差異。類風濕性關節炎血清之丙二醛-蛋白質加成物的含量是健康受試者量的1.92倍 (p < 0.0001)，而類風濕性關節炎患者血清中丙二醛的總量是健康控制組的1.83倍 (p = 0.0155)，顯示類風濕性關節炎患者有較高的氧化壓力。評估這4個胜肽是類風濕性關節炎患者血液的自體抗原。未修釋胜肽 (A1AT284-298) 與丙二醛修飾胜肽 (A1AT284-298、2M824-841和ApoB-1004022-4040 ) 能夠刺激類風濕性關節炎患者產生自體抗體IgG且與健康受試者比較具統計顯著，而抗未修飾與丙二醛修飾胜肽 (IGIK76-99、A1AT284-298、2M824-841、ApoB-1004022-4040) 能夠刺激類風濕性關節炎患者產生自體抗體 IgM 且與健康受試者比較也具統計顯著。 這些抗丙二醛修飾胜肽自體抗體 IgG 和 IgM對檢測類風濕性關節炎患者與健康受試者都有優良的鑑別效能優良的鑑別效能: 曲線下面積 (0.96 ~ 0.98)、靈敏度 (88.9% ~ 97.8%)與特異性 (88.9% ~ 100%)。 本次研究目的，除了確立蛋白質的MDA修飾、血清中MDA含量水平、MDA修飾胜肽加成物等研究外，對於本次研究我們是以蛋白質體學的方式進行探討，本次使用刀豆素A吸附血清醣蛋白親合層析法，以一維的SDS-PAGE分離，在膠體內分解處理後進入奈米級液相層析串聯質譜中分析、量化，相對定量於RA患者和健康受試者檢體血清中修飾與未修飾之丙二醛-胜肽，依模式是否能尋找血清中新穎的生物標記。此外，我們也會評估本次鑑定出的四個具表現差異之丙二醛-胜肽加成物是否在自體抗體同型中作為RA的診斷生物標記。系所名稱：醫學檢驗暨生物技術學系所thesis